Evaluación de técnicas de suavización para el seguimiento de células progenitoras en imágenes de microscopía confocal
En los últimos años, uno de los campos de estudio y análisis que ha venido tomando fuerza, en el área de la biología, es el proceso de regeneración celular de tejidos en seres vivos como algunos artrópodos y reptiles, los cuales, luego de una amputación tienen la capacidad de regenerar partes de su...
- Autores:
-
Morales Cruz, Kelly Daniela
- Tipo de recurso:
- Trabajo de grado de pregrado
- Fecha de publicación:
- 2022
- Institución:
- Universidad de Ibagué
- Repositorio:
- Repositorio Universidad de Ibagué
- Idioma:
- spa
- OAI Identifier:
- oai:repositorio.unibague.edu.co:20.500.12313/4875
- Acceso en línea:
- https://hdl.handle.net/20.500.12313/4875
- Palabra clave:
- Células progenitoras - Técnicas de suavización
Células progenitoras - Imágenes de microscopía confocal
Trackmate
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Suavización
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Microscopía confocal
Parhyale hawaiensis
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En los últimos años, uno de los campos de estudio y análisis que ha venido tomando fuerza, en el área de la biología, es el proceso de regeneración celular de tejidos en seres vivos como algunos artrópodos y reptiles, los cuales, luego de una amputación tienen la capacidad de regenerar partes de su cuerpo, como es el caso del crustáceo Parhyale hawaiensis. Para su estudio se adquieren imágenes de microscopía confocal en 4D, con muy baja relación señal a ruido, que permiten la visualización de la regeneración celular en el tiempo. Sin embargo, el proceso de reconocimiento y seguimiento de las células se hace mediante técnicas manuales, lo que hace esta tarea sea compleja, sesgada y tome demasiado tiempo. Como parte de la investigación colectiva dentro del semillero en Procesamiento de Imágenes y Reconocimiento de Patrones Lún de la Universidad de Ibagué, en este trabajo se desarrollaron, evaluaron y compararon diferentes métodos de suavización de imágenes como, los filtros no lineales A trous, Difusión anisotrópica, Bilateral, Guiado, Propagado Mejorado, K_SVD, Promedio No Local, Propagado mejorado Bilateral, ROF y TVL, con el fin de encontrar el que arroja mejores resultados en cuanto a la atenuación de ruido sin pérdida de información en imágenes 4D de Parhyale hawaiensis, obteniendo resultados comparativos que permitieron determinar que los filtros Difusión Anisotrópica y Propagado Mejorado permiten reducir el ruido de una forma óptima con la menor pérdida de información y el mayor conteo de células. También se evaluó la respuesta sobre dos imágenes sintéticas donde los filtros K-SVD y Propagado Mejorado obtuvieron los mejores resultados. Los métodos fueron implementados como parte de la herramienta Trackmate, desarrollada para el software de libre acceso Fiji, por medio de la que se puede realizar y visualizar procesos de segmentación, filtrado y unión de partículas en 2D y 3D. Trackmate originalmente cuenta tan sólo con el filtro no lineal mediana, que, si bien permite la atenuación de ruido, no siempre produce resultados óptimos. Se analizó la respuesta de cada filtro y sus resultados, basados en los parámetros de eliminación de ruido y conservación de bordes; Para ello se utilizaron imágenes naturales y sintéticas con diferentes niveles de ruido las cuales fueron procesadas con cada uno de los métodos de suavización de imágenes mencionados; al aplicar cada uno de los filtros se suaviza la imagen y se hace una detección de células. Para analizar el resultado de la aplicación de cada una de las técnicas de suavización, se determinó el número de células detectadas correctamente (verdaderos positivos), células no detectadas (falsos negativos), células contadas más de una vez (falsos positivos) y en el caso de imágenes reales, aquellos objetos que no siendo células fueron contados como tales (falsos positivos). |
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Como parte de la investigación colectiva dentro del semillero en Procesamiento de Imágenes y Reconocimiento de Patrones Lún de la Universidad de Ibagué, en este trabajo se desarrollaron, evaluaron y compararon diferentes métodos de suavización de imágenes como, los filtros no lineales A trous, Difusión anisotrópica, Bilateral, Guiado, Propagado Mejorado, K_SVD, Promedio No Local, Propagado mejorado Bilateral, ROF y TVL, con el fin de encontrar el que arroja mejores resultados en cuanto a la atenuación de ruido sin pérdida de información en imágenes 4D de Parhyale hawaiensis, obteniendo resultados comparativos que permitieron determinar que los filtros Difusión Anisotrópica y Propagado Mejorado permiten reducir el ruido de una forma óptima con la menor pérdida de información y el mayor conteo de células. También se evaluó la respuesta sobre dos imágenes sintéticas donde los filtros K-SVD y Propagado Mejorado obtuvieron los mejores resultados. Los métodos fueron implementados como parte de la herramienta Trackmate, desarrollada para el software de libre acceso Fiji, por medio de la que se puede realizar y visualizar procesos de segmentación, filtrado y unión de partículas en 2D y 3D. Trackmate originalmente cuenta tan sólo con el filtro no lineal mediana, que, si bien permite la atenuación de ruido, no siempre produce resultados óptimos. Se analizó la respuesta de cada filtro y sus resultados, basados en los parámetros de eliminación de ruido y conservación de bordes; Para ello se utilizaron imágenes naturales y sintéticas con diferentes niveles de ruido las cuales fueron procesadas con cada uno de los métodos de suavización de imágenes mencionados; al aplicar cada uno de los filtros se suaviza la imagen y se hace una detección de células. Para analizar el resultado de la aplicación de cada una de las técnicas de suavización, se determinó el número de células detectadas correctamente (verdaderos positivos), células no detectadas (falsos negativos), células contadas más de una vez (falsos positivos) y en el caso de imágenes reales, aquellos objetos que no siendo células fueron contados como tales (falsos positivos).In recent years, one of the areas of study and analysis that has been taking strength, in the area of biology, is the regeneration cellular process of tissues in living beings such as some arthropods and reptiles, which after an amputation have the capacity to regenerate parts of their body, as the case of the crustacean Parhyale hawaiensis, for its study are acquired 4D confocal microscopy images, with very low signal-to-noise ratio, allowing the visualization of cellular regeneration in real time. However, the recognition and monitoring process of the cells is done by manual techniques, which makes this task becoming too complex, biased and takes too long. As part of the collective research at the LUN seedbed of the University of Ibagué, In this project, we developed, evaluated and compared different methods of image smoothing such as non-linear filters A Trous, Anisotropic Diffussion, Bilateral, Guided, Improved Propagated, K_SVD, Non Local Means, Propagated Bilateral, ROF y TVL, in order to find the one with the best results in terms of noise attenuation without loss of information, getting comparative results that allowed us to determine that with the K_SVD filter the noise can be reduced in an optimal way with the least loss of information and the highest cell count. The response was also evaluated on two synthetic images where the K-SVD and Improved Propagated filters obtained the best results. The methods were implemented as part of the Trackmate tool, developed for Fiji's open source software, through which can be done and visualize segmentation processes, filtering and particle bonding in 2D and 3D. Trackmate originally had only the median non- linear filter, which, while this allows the noise attenuation, may not always produce the best outcomes. To this purpose, the response and results of each filter was analyzed, based on the noise elimination and edge conservation parameters. Natural and synthetic images with different noise levels were used for this purpose; by applying each of the filters, the image is smoothed and a cell detection is made. To analyze the result of the application of each of the smoothing techniques, the number of cells detected correctly was determined (true positives), undetected cells (false negatives), cells counted more than once (false positives) and in the case of real images, those objects that were not cells were counted as such (false positives).PregradoIngeniero ElectrónicoResumen.....VV Lista de figuras.....VII Lista de Tablas.....1 Glosario.....2 Introducción.....3 Planteamiento y formulación del problema.....5 Justificación.....5 Objetivos.....6 1. Estado del Arte.....7 1.1 Seguimiento de células.....7 1.1.1 TrackMate.....7 2. Marco Teórico.....12 2.1 Procesamiento digital de imagenes.....12 2.1.1 Pre-procesamiento de imagenes .. ¡Error! Marcador no definido.....13 2.2 Técnicas de suaviación de imagenes... ¡Error! Marcador no definido.....6 3. Desarollo.....20 3.1 Proceso para clonar y colaborar en un proyecto existente.....20 3.1.1 Git... ¡Error! Marcador no definido.....20 3.1.2 Git Hub. ¡Error! Marcador no definido.....21 3.2 Edicion en NetBeans del código fuente de TrackMate.....21 3.2.1 Edición de códigos fuente ... ¡Error! Marcador no definido.....22 3.2.2 Modificación código de la interfaz.. ¡Error! Marcador no definido.....23 4. Resultados.....24 4.1 Resultados de la modificación de la interfaz gráfica de usuario en la herramienta TrackMate.....24 4.2 Resultados detección de objetos en imágenes sinteticas.....27 4.2.1 Detección de objetos en imagen sintética contaminada con ruido tipo Poisson leve. ¡Error! Marcador no definido.....30 4.2.2 Detección de objetos en imagen sintética contaminada con ruido tipo Poisson fuerte .... ¡Error! Marcador no definido.....35 4.2.3 Detección de objetos en imágenes de microscopia confocal . ¡Error! Marcador no definido.....38 5. Conclusiones.....43 A. Anexo: Nombrar el anexo A de acuerdo con su contenido.....45 Bibliografía.....4760 páginasapplication/pdfMorales Cruz, K. D. (2022). Evaluación de técnicas de suavización para el seguimiento de células progenitoras en imágenes de microscopía confocal. [Trabajo de grado, Universidad de Ibagué]. https://hdl.handle.net/20.500.12313/4875https://hdl.handle.net/20.500.12313/4875spaUniversidad de IbaguéIngenieríaIbaguéIngeniería ElectrónicaPeña, R. D. (2019). Evaluación de filtros no lineales basados en los métodos rof y anisótropo para la eliminación de ruido en imágenes de microscopia confocal. Semillero Lún, Universidad de Ibagué.Averof, M., & Konstantinides, N. (14 de febrero de 2014). A common cellular basis for muscle regeneration in arthropods and vertebrates. Science, New York, 788-91.Barash, D. (2000). Bilateral filtering and anisotropic diffusion: towards and unified viewpoint. Haifa 3200: HP Labs., Technical Report HPL-18-2000.Casanova, J. A. (2017). El filtrado de imágenes. 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