Detección molecular y tipificación del virus dengue por RT-PCR y PCR anidada usando oligonucleótidos mejorados

RESUMEN: Objetivos: Modificar los oligonucleótidos comúnmente utilizados para la detección y tipificación del virus dengue y evaluar su desempeño sobre ARNs provenientes de muestras clínicas. Materiales y métodos: A partir del alineamiento de secuencias disponibles en el GenBank para la región C-prM/M se determinó la variabilidad genética dentro de cada serotipo del virus dengue, lo cual permitió realizar modificaciones a los oligonucleótidos convencionalmente usados en la tipificación. Tales modificaciones incluyeron la adición y eliminación de nucleótidos en el extremo 3', teniendo en cuenta la posición del codón, así como la inclusión de sitios degenerados en posiciones altamente variables. Los oligonucleótidos se evaluaron a diferentes concentraciones sobre ARNs extraídos a partir de cultivos celulares infectados y posteriormente de sueros de pacientes con diagnóstico probable de dengue. Resultados: Los oligonucleótidos amplificaron específicamente cada serotipo del virus dengue, tanto desde sobrenadantes de cultivo como desde muestras clínicas en prueba piloto. Conclusiones: El rediseño de los oligonucleótidos consideró la variabilidad genética acumulada en más de 15 años, mostrándose experimentalmente su valor y utilidad en la detección y tipificación del virus dengue.

• Autores: Usme Ciro, José Aldemar; Gómez Castañeda, Alba Mery; Gallego Gómez, Juan Carlos
• Tipo de recurso: Article of investigation
• Fecha de publicación: 2012
• Institución: Universidad de Antioquia
• Repositorio: Repositorio UdeA
• Idioma: spa
• OAI Identifier: oai:bibliotecadigital.udea.edu.co:10495/36062
• Acceso en línea: https://hdl.handle.net/10495/36062; http://www.scielo.org.co/scielo.php?pid=S0120-55522012000100002&script=sci_abstract&tlng=es
• Palabra clave: Virus del Dengue; Dengue Virus; Reacción en Cadena de la Polimerasa de Transcriptasa Inversa; Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction; Oligonucleótidos; Oligonucleotides; Virosis; Virus Diseases; Informes de Casos; Case Reports
• Rights: openAccess
• License: https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/