Identificación molecular con base en el gen hsp70 de aislamientos clínicos de Leishmania spp. en Colombia

RESUMEN: Introducción. La leishmaniasis es una enfermedad de gran prevalencia en Colombia, donde al menos seis especies diferentes la originan en el ser humano, con un amplio rango de características clínicas. La tipificación de la especie es importante, no solo desde el punto de vista epidemiológic...

Full description

Autores:
Muskus López, Carlos Enrique
Marín Villa, Marcel
Montalvo Álvarez, Ana Margarita
Fraga Nodarse, Jorge
Monzote Fidalgo, Lianet
Montano, Ivón
Van der Auwera, Gert
Tipo de recurso:
Article of investigation
Fecha de publicación:
2016
Institución:
Universidad de Antioquia
Repositorio:
Repositorio UdeA
Idioma:
spa
OAI Identifier:
oai:bibliotecadigital.udea.edu.co:10495/42332
Acceso en línea:
https://hdl.handle.net/10495/42332
Palabra clave:
Colombia
ADN Protozoario
DNA, Protozoan
Proteínas HSP70 de Choque Térmico
HSP70 Heat-Shock Proteins
Leishmania
Leishmaniasis Cutánea
Leishmaniasis, Cutaneous
Reacción en Cadena de la Polimerasa
Polymerase Chain Reaction
Polimorfismo de Longitud del Fragmento de Restricción
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description RESUMEN: Introducción. La leishmaniasis es una enfermedad de gran prevalencia en Colombia, donde al menos seis especies diferentes la originan en el ser humano, con un amplio rango de características clínicas. La tipificación de la especie es importante, no solo desde el punto de vista epidemiológico, sino para el diagnóstico, dado que el tratamiento puede variar dependiendo de la especie identificada. En la identificación se han utilizado varias alternativas metodológicas con diferentes niveles de poder discriminatorio. Objetivo. Identificar especies de Leishmania mediante la amplificación molecular de un fragmento del gen hsp70. Materiales y métodos. Se amplificó un fragmento del gen hsp70 mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR-hsp70) y se hizo el análisis de los polimorfismos de la longitud (Restriction Fragment Length Polymorphism, RFLP) de los fragmentos de restricción de 81 aislamientos clínicos de Leishmania spp. de pacientes con leishmaniasis cutánea y mucocutánea para la identificación de las especies presentes. Resultados. Se obtuvo un solo amplicón para todas las muestras analizadas. La restricción enzimática de los 81 productos permitió la identificación de 70 con dos patrones de bandas que correspondían a dos alelos de Leishmania braziliensis (62 y ocho aislamientos, respectivamente), nueve aislamientos compatibles con L. panamensis y dos con L. guyanensis. El origen geográfico de los aislamientos coincidió con el de reportes previos sobre la distribución de dichas especies en Colombia. Conclusiones. La técnica de la PCR-hsp70 y el análisis de RFLP fueron útiles para identificar las especies de Leishmania aisladas de muestras clínicas de Colombia y pueden aplicarse también en el estudio de cepas de vectores y reservorios de importancia epidemiológica.
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La tipificación de la especie es importante, no solo desde el punto de vista epidemiológico, sino para el diagnóstico, dado que el tratamiento puede variar dependiendo de la especie identificada. En la identificación se han utilizado varias alternativas metodológicas con diferentes niveles de poder discriminatorio. Objetivo. Identificar especies de Leishmania mediante la amplificación molecular de un fragmento del gen hsp70. Materiales y métodos. Se amplificó un fragmento del gen hsp70 mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR-hsp70) y se hizo el análisis de los polimorfismos de la longitud (Restriction Fragment Length Polymorphism, RFLP) de los fragmentos de restricción de 81 aislamientos clínicos de Leishmania spp. de pacientes con leishmaniasis cutánea y mucocutánea para la identificación de las especies presentes. Resultados. Se obtuvo un solo amplicón para todas las muestras analizadas. La restricción enzimática de los 81 productos permitió la identificación de 70 con dos patrones de bandas que correspondían a dos alelos de Leishmania braziliensis (62 y ocho aislamientos, respectivamente), nueve aislamientos compatibles con L. panamensis y dos con L. guyanensis. El origen geográfico de los aislamientos coincidió con el de reportes previos sobre la distribución de dichas especies en Colombia. Conclusiones. La técnica de la PCR-hsp70 y el análisis de RFLP fueron útiles para identificar las especies de Leishmania aisladas de muestras clínicas de Colombia y pueden aplicarse también en el estudio de cepas de vectores y reservorios de importancia epidemiológica.ABSTRACT: Introduction: Leishmaniasis is highly prevalent in Colombia, where at least six different species can cause disease of varying clinical presentations in humans. The identification of the infecting species is quite important for prognosis, therapeutics and epidemiology. Different techniques with variable discriminatory power have been used for the identification. Objective: To carry out the molecular identification of Leishmania species through the amplification of a fragment of the hsp70 gene. Materials and methods: Molecular amplification of the hsp70 gene fragment (PCR-hsp70) followed by restriction fragment length polymorphism analysis (RFLP) was done for identification purposes using DNA from 81 clinical isolates of Leishmania. Results: A single amplicon was obtained for all samples analyzed. The enzymatic restrictions of the 81 PCR products identified 70 with a banding pattern corresponding to L. braziliensis with two different patterns (62 and eight isolates, respectively), nine isolates compatible with L. panamensis and two with L. guyanensis. The geographical origin of the isolates is consistent with previous reports about the distribution of the corresponding species in Colombia. Conclusions: The PCR-hsp70/RFLP technique used is a valid tool for the identification of Leishmania species isolated from clinical samples of patients in Colombia, which may also be applicable to the study of strains obtained from vectors and reservoirs with epidemiological significance.COL00150998 páginasapplication/pdfspaInstituto Nacional de SaludBogotá, Colombiahttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/co/info:eu-repo/semantics/openAccesshttp://purl.org/coar/access_right/c_abf2Identificación molecular con base en el gen hsp70 de aislamientos clínicos de Leishmania spp. en ColombiaMolecular identification of Leishmania spp. in clinical isolates from Colombia based on hsp70 geneArtículo de investigaciónhttp://purl.org/coar/resource_type/c_2df8fbb1https://purl.org/redcol/resource_type/ARThttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85info:eu-repo/semantics/articleinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionColombiaADN ProtozoarioDNA, ProtozoanProteínas HSP70 de Choque TérmicoHSP70 Heat-Shock ProteinsLeishmaniaLeishmaniasis CutáneaLeishmaniasis, CutaneousReacción en Cadena de la PolimerasaPolymerase Chain ReactionPolimorfismo de Longitud del Fragmento de RestricciónPolymorphism, Restriction Fragment Lengthhttps://id.nlm.nih.gov/mesh/D003105https://id.nlm.nih.gov/mesh/D016054https://id.nlm.nih.gov/mesh/D018840https://id.nlm.nih.gov/mesh/D007891https://id.nlm.nih.gov/mesh/D016773https://id.nlm.nih.gov/mesh/D016133https://id.nlm.nih.gov/mesh/D012150Biomédica44Suplemento 13736BiomédicaPublicationORIGINALMuskusCarlos_2016_ParasitoTropicalInmuno.pdfMuskusCarlos_2016_ParasitoTropicalInmuno.pdfArtículo de investigaciónapplication/pdf248135https://bibliotecadigital.udea.edu.co/bitstreams/c64620e4-9645-44c2-bed7-f5b61681d699/download7bed5539bc88a56302b50aac17c1f978MD51trueAnonymousREADCC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; 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