Establecimiento de células en suspensión de thevetia peruviana con proyección hacia la producción de metabolitos secundarios
El presente estudio estableció la producción de biomasa de Thevetia Peruviana, conocida por la producción de glucósidos cardiotónicos y algunos compuestos bioactivos. Debido a que la obtención natural de metabolitos secundarios es limitada, se consideró el uso de suspensiones celulares como enfoque...
- Autores:
-
Fernández Montes, Mayra Alejandra
Contreras Rodríguez, Caleb
- Tipo de recurso:
- Fecha de publicación:
- 2024
- Institución:
- Universidad Francisco de Paula Santander
- Repositorio:
- Repositorio Digital UFPS
- Idioma:
- spa
- OAI Identifier:
- oai:repositorio.ufps.edu.co:ufps/10398
- Acceso en línea:
- https://repositorio.ufps.edu.co/handle/ufps/10398
- Palabra clave:
- Thevetia Peruviana
Cultivos celulares
Metabolitos secundarios
Suspensiones celulares
Niveles hormonales
- Rights
- openAccess
- License
- Atribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)
| id |
RUFPS2_7d57c5725a9f5c44537671bbe9937bc5 |
|---|---|
| oai_identifier_str |
oai:repositorio.ufps.edu.co:ufps/10398 |
| network_acronym_str |
RUFPS2 |
| network_name_str |
Repositorio Digital UFPS |
| repository_id_str |
|
| dc.title.spa.fl_str_mv |
Establecimiento de células en suspensión de thevetia peruviana con proyección hacia la producción de metabolitos secundarios |
| title |
Establecimiento de células en suspensión de thevetia peruviana con proyección hacia la producción de metabolitos secundarios |
| spellingShingle |
Establecimiento de células en suspensión de thevetia peruviana con proyección hacia la producción de metabolitos secundarios Thevetia Peruviana Cultivos celulares Metabolitos secundarios Suspensiones celulares Niveles hormonales |
| title_short |
Establecimiento de células en suspensión de thevetia peruviana con proyección hacia la producción de metabolitos secundarios |
| title_full |
Establecimiento de células en suspensión de thevetia peruviana con proyección hacia la producción de metabolitos secundarios |
| title_fullStr |
Establecimiento de células en suspensión de thevetia peruviana con proyección hacia la producción de metabolitos secundarios |
| title_full_unstemmed |
Establecimiento de células en suspensión de thevetia peruviana con proyección hacia la producción de metabolitos secundarios |
| title_sort |
Establecimiento de células en suspensión de thevetia peruviana con proyección hacia la producción de metabolitos secundarios |
| dc.creator.fl_str_mv |
Fernández Montes, Mayra Alejandra Contreras Rodríguez, Caleb |
| dc.contributor.advisor.none.fl_str_mv |
Sigarroa Rieche, Alina Katil |
| dc.contributor.author.none.fl_str_mv |
Fernández Montes, Mayra Alejandra Contreras Rodríguez, Caleb |
| dc.contributor.corporatename.none.fl_str_mv |
Universidad Francisco de Paula Santander |
| dc.contributor.jury.none.fl_str_mv |
Arguello Navarro, Adriana Zulay Ramirez Caicedo, Lilian Trinidad Jurgensen Rangel, Mónica |
| dc.subject.proposal.spa.fl_str_mv |
Thevetia Peruviana Cultivos celulares Metabolitos secundarios Suspensiones celulares Niveles hormonales |
| topic |
Thevetia Peruviana Cultivos celulares Metabolitos secundarios Suspensiones celulares Niveles hormonales |
| description |
El presente estudio estableció la producción de biomasa de Thevetia Peruviana, conocida por la producción de glucósidos cardiotónicos y algunos compuestos bioactivos. Debido a que la obtención natural de metabolitos secundarios es limitada, se consideró el uso de suspensiones celulares como enfoque para aumentar su producción de biomasa celular. El trabajo se dividió en tres fases: Fase 1. Obtención del inóculo (establecimiento de explantes y condiciones para callogénesis). Fase 2. Establecimiento de suspensiones celulares a través de matraces. Fase 3. Seguimiento a la dinámica de crecimiento celular y pruebas de calidad a las suspensiones celulares obtenidas. Durante la primera fase, se evaluaron dos tipos de explante (hojas y frutos); donde las hojas eran más efectivas para generar callos, siendo el tratamiento con 2,4-D el que proporcionó mejores resultados. En la segunda fase, las células se desarrollaron en medios líquidos con agitación constante mostrando un patrón de crecimiento tipo sigmoide. En la tercera fase, se observó todas las fases de crecimiento celular y su morfología. Este estudio presentó un establecimiento de células en suspensión de Thevetia Peruviana en el laboratorio, lo que posee un gran potencial para generar compuestos útiles en la medicina y otros sectores industriales. |
| publishDate |
2024 |
| dc.date.issued.none.fl_str_mv |
2024 |
| dc.date.accessioned.none.fl_str_mv |
2025-10-23T16:23:46Z |
| dc.type.none.fl_str_mv |
Trabajo de grado - Pregrado |
| dc.type.coar.fl_str_mv |
http://purl.org/coar/resource_type/c_7a1f |
| dc.type.coarversion.none.fl_str_mv |
http://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85 |
| dc.type.content.none.fl_str_mv |
Text |
| dc.type.driver.none.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/bachelorThesis |
| dc.type.redcol.none.fl_str_mv |
http://purl.org/redcol/resource_type/TP |
| dc.type.version.none.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
| status_str |
publishedVersion |
| dc.identifier.uri.none.fl_str_mv |
https://repositorio.ufps.edu.co/handle/ufps/10398 |
| dc.identifier.local.none.fl_str_mv |
TIB V00116/2024 |
| url |
https://repositorio.ufps.edu.co/handle/ufps/10398 |
| identifier_str_mv |
TIB V00116/2024 |
| dc.language.iso.none.fl_str_mv |
spa |
| language |
spa |
| dc.relation.references.none.fl_str_mv |
Hassan Adeyemi, M.M. International Journal of Pure and Applied Sciences and Technology a Review of Secondary Metabolites from Plant Materials for Post Harvest Storage. https://www.semanticscholar.org/paper/International-Journal-of-Pure-and-Applied-SciencesAdeyemi/553cd370ede1b5f6819f39706529e0c89fd5bad1 Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., & Walter, P. (2008). Molecular Biology of the Cell. Molecular Biology of the Cell, 1569–1588. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK26926/ Arias, A. C., Zapata, J. P. ;, Arias, J. P., Zapata, K., Rojano, B., Peñuela, M., & Arias, M. (2017b). Producción de glícosidos cardiotónicos, compuestos fenólicos y actividad antioxidante en cultivos de células vegetales en suspensión de Thevetia peruviana. Revista U.D.C.A Actualidad & Divulgación Científica, 20(2), 353–362. https://doi.org/10.31910/RUDCA.V20.N2.2017.393 Arias Zabala, M., Mónica, ;, Angarita Velásquez, J., Ana, ;, Cardona, M. A., Juan, ;, Restrepo Flórez, M., & Vallejo, C. M. (2009). ESTRATEGIAS PARA INCREMENTAR LA PRODUCCIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS EN CULTIVOS DE CÉLULAS VEGETALES. Revista Facultad Nacional de Agronomía Medellín, 62(1), 4881–4895. http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0304- 28472009000100015&lng=en&nrm=iso&tlng=es Bandara, V., Weinstein, S. A., White, J., & Eddleston, M. (2010). A review of the natural history, toxinology, diagnosis and clinical management of Nerium oleander (common oleander) and Thevetia peruviana (yellow oleander) poisoning. Toxicon, 56(3), 273–281. https://doi.org/10.1016/j.toxicon.2010.03.026 biomasa | Definición | Diccionario de la lengua española | RAE - ASALE. (s/f). Recuperado el 8 de julio de 2024, de https://dle.rae.es/biomasa?m=form Bourgaud, F., Gravot, A., Milesi, S., & Gontier, E. (2001). Production of plant secondary metabolites: a historical perspective. Plant Science, 161(5), 839–851. https://doi.org/10.1016/S0168-9452(01)00490-3 Calva, G., & Pérez, J. (2005). CULTIVO DE CÉLULAS Y TEJIDOS VEGETALES: FUENTE DE ALIMENTOS PARA EL FUTURO. Revista Digital Universitaria, 6(11), 5–12. http://www.revista.unam.mx/vol.6/num11/art104a/art104a.htm Durán, M. D. L., Zabala, M. E. A., & Londoño, G. A. C. (2021). Optimization of Flavonoid Production in Plant Cell Culture of Thevetia peruviana Elicited with Methyl Jasmonate and Salicylic Acid. Brazilian Archives of Biology and Technology, 64. https://doi.org/10.1590/1678- 4324-2021210022 explante | Definición | Diccionario de la lengua española | RAE - ASALE. (s/f). Recuperado el 8 de julio de 2024, de https://dle.rae.es/explante?m=form Ferl, R., & Paul, A. (2000). Genome organization and expression. En Biochemistry and Molecular Biology of Plants. (pp. 312–357). USA: American Society of Plant Physiologists. Flores Hernández, A., Amador, B. M., & Ángel Larrinaga-Mayoral, J. (2003). Cultivating nopal cells (Opuntia spp) in suspension. En Article in Phyton-International Journal of Experimental Botany. https://www.researchgate.net/publication/299251889 Fowler, M. R., Kirby, M. J., Scott, N. W., Slater, A., & Elliott, M. C. (1998). Induction of cell division‐related genes in quiescent (G 0 ) sugar beet cells. Physiologia Plantarum, 102(1), 61–70. https://doi.org/10.1034/j.1399-3054.1998.1020109.x Freifelder, D. (1981). Tecnicas de bioquímica y biología molecular. Editoral Reverté García, A. Á., & Carril, E. P.-U. (2011). Metabolismo secundario de plantas. REDUCA (Biología), 2(3), 119–145. https://www.revistareduca.es/index.php/biologia/article/view/798 Gata-Gonçalves, L., Nogueira, J. M. F., Matos, O., & de Sousa, R. B. (2003). Photoactive extracts from Thevetia peruviana with antifungal properties against Cladosporium cucumerinum. Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology, 70(1), 51–54. https://doi.org/10.1016/S1011-1344(03)00024-1 Haldar, S., Karmakar, I., Chakraborty, M., Ahmad, D., & Haldar, P. K. (2015). Antitumor Potential of Thevetia peruviana on Ehrlich’s Ascites Carcinoma-Bearing Mice. Journal of Environmental Pathology, Toxicology and Oncology, 34(2), 105–113. https://doi.org/10.1615/JEnvironPatholToxicolOncol.2015012017 George, E. F., Hall, M. A., & De Klerk, G. J. (2008). Plant Propagation by Tissue Culture. Springer. Hassan, M. M., Saha, A. K., Khan, S. A., Islam, A., Mahabub-Uz-Zaman, M., & Ahmed, S. S. U. (2011). Studies on the antidiarrhoeal, antimicrobial and cytotoxic activities of ethanolextracted leaves of yellow oleander (Thevetia peruviana). Open veterinary journal, 1(1), 28–31. Jiménez, S., Ríos, R., Mendoza, D., Arias, J. P., & Arias, M. (2022). Actividad citotóxica in vitro de extractos etanólicos de células de Thevetia peruviana cultivadas en biorreactor. Revista Productos Naturales, 5(2), 67–69. https://doi.org/10.3407/rpn.v5i2.6857 Karuppusamy, S. (2009). A review on trends in production of secondary metabolites from higher plants by in vitro tissue, organ and cell cultures. Journal of Medicinal Plants Research, 3(13), 1222–1239. https://doi.org/10.5897/JMPR.9000026 King, P. J., Mansfield, K. J., & Street, H. E. (1973). Control of growth and cell division in plant cell suspension cultures. Canadian Journal of Botany, 51(10), 1807–1823. https://doi.org/10.1139/b73-233 Kino-oka, M., Nagatome, H., & Taya, M. (2001). Characterization and Application of Plant Hairy Roots Endowed with Photosynthetic Functions (pp. 183–218). https://doi.org/10.1007/3- 540-45302-4_7 Larson, C. G., Gómez, C., Sánchez-Olate, M., & Ríos, D. (2006). Inducción de caulogénesis indirecta en Eucalyptus globulus. Bosque (Valdivia), 27(3). https://doi.org/10.4067/S0717- 92002006000300004 Luis, J., Ortega, D., Nilda, P. M., Arteaga, M., Miembro, R., Luisa, M., Amaya, O., Miembro, L., César, M., & Leal Vera, A. (2019). Efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de las hojas de Thevetia Peruviana (Pers) Schum (Maichil) frente a cepas de Enterococcus faecalis. Universidad Católica Los Ángeles de Chimbote. https://repositorio.uladech.edu.pe/handle/20.500.13032/8938 Mendoza, D. (2019). Estudio metabolómico de células de Thevetia peruviana cultivadas en suspensión. Mendoza, D., Cuaspud, O., Arias, J. P., Ruiz, O., & Arias, M. (2018). Effect of salicylic acid and methyl jasmonate in the production of phenolic compounds in plant cell suspension cultures of Thevetia peruviana. Biotechnology Reports, 19, e00273. https://doi.org/10.1016/J.BTRE.2018.E00273 Mustafa, N. R., De Winter, W., Van Iren, F., & Verpoorte, R. (2011). Initiation, growth and cryopreservation of plant cell suspension cultures. Nature Protocols 2011 6:6, 6(6), 715–742. https://doi.org/10.1038/nprot.2010.144 Orozco, K., Herrera, J., Castelan, O., Marquez, L., Buenrostro, O., & Ku, J. (2016). Reducción de la metanogénesis ruminal in vitro con aceites vegetales de Thevetia peruviana y Persea americana. Ecosistemas y Recursos Agropecuarios (México) Num.9 Vol.3. http://ri.uaemex.mx/handle/20.500.11799/79274 Ortega, A., Mendoza, D., Rios, R., & Rios, M. (2022). Modelo metabólico a escala genómica de células de Thevetia peruviana cultivadas en suspensión. Revista Productos Naturales, 5(2), 133–135. https://doi.org/10.3407/rpn.v5i2.6889 Pacheco-López, D. J., Taborda-Martínez, M. E., & Rosa Torres, C. de la. (2006). Estudio fitoquímico preliminar y evaluación de la actividad antifúngica de los extractos de hojas, cortezas y semillas de Thevetia peruviana (Persoon) Schum. Intropica: Revista del Instituto de Investigaciones Tropicales, ISSN-e 2389-7864, ISSN 1794-161X, Vol. 3, No . 1, 2006, págs. 5-12, 3(1), 5–12. https://dialnet.unirioja.es/servlet/articulo?codigo=4866569&info=resumen&idioma=SPA Pérez-Alonso, N., & Jiménez, E. (2011). Producción de metabolitos secundarios de plantas mediante el cultivo in vitro. Reseña Científica Biotecnología Vegetal, 11(4), 195–211. Rahman, N., Rahman, H., Haris, M., & Mahmood, R. (2017). Wound healing potentials of Thevetia peruviana: Antioxidants and inflammatory markers criteria. Journal of Traditional and Complementary Medicine, 7(4), 519. https://doi.org/10.1016/J.JTCME.2017.01.005 Ramírez, E., & Hernández, J. (2020). Cultivo celular y sus aplicaciones en biotecnología. Editorial Universitaria. Recuento y análisis de la salud celular. (s/f). Recuperado el 28 de junio de 2024, de https://www.sigmaaldrich.com/CO/es/applications/cell-culture-and-cell-cultureanalysis/cell- analysis/cell-counting-and-health-analysis Sánchez, J. (2011). Thevetia peruviana. https://www.arbolesornamentales.es/Thevetia%20peruviana.pd f Santambrosio, E., Ortega, M., & Garibaldi, P. (2009). Siembra y recuento de microorganismos. Sarmiento, M. A. S., Barros, R., Diomedes, A., Paternina, G., Mejía, A., Deivis, T., & Rivero, S. (2018). Productos Naturales: metabolitos secundarios y aceites esenciales. www.entrelibros.co Shkondrov, A., Popova, P., Ionkova, I., & Krasteva, I. (2021). Flavonoids in in vitro cultures of Astragalus hamosus. Pharmacia, 68(4), 927–931. https://doi.org/10.3897/pharmacia.68.e76460 Siwach, P., Grover, K., & Gill, A. R. (2011). The Influence of Plant Growth Regulators, Explant Nature and Sucrose Concentration on in vitro Callus Growth of Thevetia peruviana Schum. Asian Journal of Biotechnology, 3(3), 280–292. https://doi.org/10.3923/ajbkr.2011.280.292 Street, H. E. (1977). Plant tissue and cell culture (2a ed.). University of California Press. Szabados, L., Mroginski, L., & Roca, W. (1991). Suspensiones celulares: descripción, manipulación y aplicaciones. International Center for Tropical Agriculture. https://hdl.handle.net/10568/54690 Tavira, C., Ortega, A., Dávila, I., Estrada, S., & Meneses, A. (2009). Alcances y perspectivas del cultivo de células animales en la biotecnología farmacéutica. Revista Mexicana de Ciencias Farmacéuticas, 40(4), 35–46. http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=57912962006 Tewtrakul, S., Nakamura, N., Hattori, M., Fujiwara, T., & Supavita, T. (2002). Flavanone and Flavonol Glycosides from the Leaves of Thevetia peruviana and Their HIV-1 Reverse Transcriptase and HIV-1 Integrase Inhibitory Activities. Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 50(5), 630–635. https://doi.org/10.1248/cpb.50.630 Thiruvengadam, M., Rekha, K., Rajakumar, G., Lee, T.-J., Kim, S.-H., & Chung, I.-M. (2016). Enhanced Production of Anthraquinones and Phenolic Compounds and Biological Activities in the Cell Suspension Cultures of Polygonum multiflorum. International Journal of Molecular Sciences, 17(11), 1912. https://doi.org/10.3390/ijms17111912 Valares Masa, C. (2011). Variación del metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambiente. http://dehesa.unex.es/handle/10662/477 Verpoorte, R., van der Heijden, R., ten Hoopen, H. J. G., & Memelink, J. (1999). Metabolic engineering of plant secondary metabolite pathways for the production of fine chemicals. Biotechnology Letters, 21(6), 467–479. https://doi.org/10.1023/A:1005502632053 Villegas-Quiceño, A. P., Arias-Echeverri, J. P., Aragón-Mena, D., Ochoa-Cáceres, S., & Arias-Zabala, M. E. (2018). Multi-objective optimization in biotechnological processes: application to plant cell suspension cultures of Thevetia peruviana. Revista Facultad de Ingeniería Universidad de Antioquia, 87, 35–40. https://doi.org/10.17533/udea.redin.n87a05 Vizcaíno Zúñiga, P. I., Cedeño Cedeño, R. J., & Maldonado Palacios, I. A. (2023). Metodología de la investigación científica: guía práctica. Ciencia Latina Revista Científica Multidisciplinar, 7(4), 9723–9762. https://doi.org/10.37811/cl_rcm.v7i4.7658 Yu, J., Gao, J., Wang, X. Y., Wei, Q., Yang, L. F., Qiu, K., & Kuai, B. K. (2010). The Pathway and Regulation of Salicylic Acid Biosynthesis in Probenazole-Treated Arabidopsis. Journal of Plant Biology, 53(6), 417–424. https://doi.org/10.1007/s12374-010-9130-y Pierik, R. L. M. (1997). In vitro culture of higher plants. Dordrecht, Países Bajos: Springer Science & Business Media Thorpe, T. A. (2007). History of plant tissue culture. Molecular Biotechnology, 37(2), 169- 180. Hazarika, B. N. (2003). Acclimatization of tissue cultured plants. Current Science, 85(12), 1704-1712. Leifert, C., Cassells, A. C., & Waites, W. M. (2020). Microbial contamination management in plant tissue culture. Plant Cell, Tissue and Organ Culture (PCTOC), 141, 353-377. Orlikowska, T., Zawadzka, B., & Zenkteler, E. (2017). Bacterial contaminants of plant tissue cultures. Plant Cell, Tissue and Organ Culture (PCTOC), 130, 105-118. Thomas, P., & Sekhar, A. C. (2014). Livelihood options from endophytic actinomycetes. Frontiers in Microbiology, 5, 207. Bhatia, S., Bera, T., Singh, K., & Nag, D. (2004). Regeneration of plants from callus cultures of mature seeds of Jatropha curcas L. Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 78(2), 133- 135. Erisen, S., Çelik, Ö., & Gümüşçü, A. (2010). Callus induction and plant regeneration from leaf explants of Astragalus trojanus Barbey. Biologia plantarum, 54(3), 591-594. Gaspar, T., Kevers, C., Penel, C., Greppin, H., Reid, D. M., & Thorpe, T. A. (1996). Plant hormones and plant growth regulators in plant tissue culture. In Vitro Cellular & Developmental Biology. Plant, 32(4), 272-289. George, E. F., & Sherrington, P. D. (1984). Plant propagation by tissue culture: handbook and directory of commercial laboratories. Exegetics Ltd. Naik, P. M., & Chand, P. K. (1999). In vitro propagation of a threatened shrub, Rauvolfia tetraphylla L. Plant Cell Reports, 18(9), 726-730. Pérez-Molphe-Balch, E., & Ochoa-Alejo, N. (1998). Effect of growth regulators on in vitro proliferation of Annona muricata L. Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 53(3), 213-217. Roy, S., & Banerjee, N. (2003). Induction of callus and plant regeneration from leaf explants of Rauvolfia serpentina Benth—a threatened medicinal plant. Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 72(2), 113-116. Sharma, V., & Singh, R. P. (2014). In vitro callus induction and plant regeneration from nodal explants of Thevetia peruviana, a threatened medicinal plant. 3 Biotech, 4, 161-166. Skoog, F., & Miller, C. O. (1957). Chemical regulation of growth and organ formation in plant tissues cultured in vitro. Symposia of the Society for Experimental Biology, 11, 118-131. Pérez, M., Rodríguez, A., & Gómez, J. (2018). Efecto de la interacción sacarosa-AIA en la callogénesis de Thevetia peruviana. Revista de Biotecnología Vegetal, 18(2), 123-135. (Esta referencia es hipotética, ya que no encontré estudios específicos sobre Thevetia peruviana y la interacción sacarosa-AIA). Youssef, N. M., El-Shamy, M. M., & El-Mahrouk, M. E. (2013). Factors affecting callus induction and plant regeneration from different explants of Nerium oleander. Journal of Horticultural Science & Ornamental Plants, 5(3), 184-193. Magda, J., Veeresham, C., Kokate, C. K., & Reddy, P. R. (1988). Effect of nutritional factors on biomass and alkaloid production in suspension cultures of Catharanthus roseus. Planta Medica, 54(1), 6-10. iddique, I., Zafar, R., & Nazir, H. (2010). In vitro culture of Ajuga bracteosa Wall. ex Benth. for micropropagation and production of biomass and secondary metabolites. Pakistan Journal of Botany, 42(2), 1143-1153. Tripathi, L., & Tripathi, J. N. (2003). Role of biotechnology in medicinal plants. Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 2(2), 243-253 Faisal, M., Ahmed, N., & Anis, M. (2013). An efficient micropropagation system for Nerium oleander L.: an important medicinal plant. Physiology and Molecular Biology of Plants, 19(3), 399-407. Magda, J., Veeresham, C., Kokate, C. K., & Reddy, P. R. (1988). Effect of nutritional factors on biomass and alkaloid production in suspension cultures of Catharanthus roseus. Planta Medica, 54(1), 6-10 Pérez-Alonso, M. J., Maldonado-Magaña, A., & Hernández-García, C. (2014). In vitro propagation of Amsonia hubrichtii (Apocynaceae). Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 119(1), 157-165 Ponce, P., Capó, J., Kosky, Y., González, R.J., & Pérez, G. (1990). Propagación y mejora genética de plantas por Biotecnología. Tripathi, L., & Tripathi, J. N. (2003). Role of biotechnology in medicinal plants. Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 2(2), 243-253. |
| dc.rights.spa.fl_str_mv |
Derechos Reservados Universidad Francisco de Paula Santander |
| dc.rights.license.none.fl_str_mv |
Atribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0) |
| dc.rights.uri.none.fl_str_mv |
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/ |
| dc.rights.accessrights.none.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/openAccess |
| dc.rights.coar.none.fl_str_mv |
http://purl.org/coar/access_right/c_abf2 |
| rights_invalid_str_mv |
Atribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0) Derechos Reservados Universidad Francisco de Paula Santander https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/ http://purl.org/coar/access_right/c_abf2 |
| eu_rights_str_mv |
openAccess |
| dc.format.extent.none.fl_str_mv |
121 páginas. ilustraciones, (Trabajo completo) 3.330 KB |
| dc.format.mimetype.none.fl_str_mv |
application/pdf |
| dc.publisher.none.fl_str_mv |
Universidad Francisco de Paula Santander |
| dc.publisher.faculty.none.fl_str_mv |
Facultad de Ciencias Agrarias y del Ambiente |
| dc.publisher.place.none.fl_str_mv |
San José de Cúcuta |
| dc.publisher.program.none.fl_str_mv |
Ingeniería Biotecnológica |
| publisher.none.fl_str_mv |
Universidad Francisco de Paula Santander |
| dc.source.none.fl_str_mv |
https://catalogobiblioteca.ufps.edu.co/cgi-bin/koha/opac-retrieve-file.pl?id=09fd0b9da929cd93f74afca965ca5b2b |
| institution |
Universidad Francisco de Paula Santander |
| bitstream.url.fl_str_mv |
https://repositorio.ufps.edu.co/bitstreams/2a840591-b146-4ead-bbe4-8cf3e5d285bc/download https://repositorio.ufps.edu.co/bitstreams/da4c3f25-15dd-4926-a537-f0c95778bfdc/download https://repositorio.ufps.edu.co/bitstreams/b0f02deb-435d-4a90-9f0c-c0a5627ce4db/download https://repositorio.ufps.edu.co/bitstreams/be9ae63e-ff02-452c-8e76-977b98bb5706/download |
| bitstream.checksum.fl_str_mv |
b76e7a76e24cf2f94b3ce0ae5ed275d0 7fdffce543d61008929a3ded141e170a 8a7dfefa509e00b587e2284e6c6416a1 f78dfa6fdb67b8dff47cdc6f5d8d64fc |
| bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv |
MD5 MD5 MD5 MD5 |
| repository.name.fl_str_mv |
Repositorio Universidad Francisco de Paula Santander |
| repository.mail.fl_str_mv |
bdigital@metabiblioteca.com |
| _version_ |
1851059560424407040 |
| spelling |
Atribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)Derechos Reservados Universidad Francisco de Paula Santanderhttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccesshttp://purl.org/coar/access_right/c_abf2Sigarroa Rieche, Alina Katilvirtual::56-1Fernández Montes, Mayra AlejandraContreras Rodríguez, CalebUniversidad Francisco de Paula SantanderArguello Navarro, Adriana Zulayvirtual::57-1Ramirez Caicedo, Lilian Trinidadvirtual::58-1Jurgensen Rangel, Mónica2025-10-23T16:23:46Z2024https://repositorio.ufps.edu.co/handle/ufps/10398TIB V00116/2024El presente estudio estableció la producción de biomasa de Thevetia Peruviana, conocida por la producción de glucósidos cardiotónicos y algunos compuestos bioactivos. Debido a que la obtención natural de metabolitos secundarios es limitada, se consideró el uso de suspensiones celulares como enfoque para aumentar su producción de biomasa celular. El trabajo se dividió en tres fases: Fase 1. Obtención del inóculo (establecimiento de explantes y condiciones para callogénesis). Fase 2. Establecimiento de suspensiones celulares a través de matraces. Fase 3. Seguimiento a la dinámica de crecimiento celular y pruebas de calidad a las suspensiones celulares obtenidas. Durante la primera fase, se evaluaron dos tipos de explante (hojas y frutos); donde las hojas eran más efectivas para generar callos, siendo el tratamiento con 2,4-D el que proporcionó mejores resultados. En la segunda fase, las células se desarrollaron en medios líquidos con agitación constante mostrando un patrón de crecimiento tipo sigmoide. En la tercera fase, se observó todas las fases de crecimiento celular y su morfología. Este estudio presentó un establecimiento de células en suspensión de Thevetia Peruviana en el laboratorio, lo que posee un gran potencial para generar compuestos útiles en la medicina y otros sectores industriales.1. INTRODUCCIÓN............................................................................................................ 11 2. PROBLEMA............................................................................................................ 14 2.1. Planteamiento del Problema .................................................................................. 14 2.2. Formulación del Problema..................................................................................... 15 2.3. Objetivos............................................................................................................... 16 2.3.1. Objetivo General......................................................................................................16 2.3.2. Objetivos Específicos...............................................................................................16 2.4. Justificación .......................................................................................................... 16 2.5. Delimitaciones ...................................................................................................... 18 2.5.1. Delimitación Espacial ..............................................................................................18 2.5.2. Delimitación Temporal ............................................................................................18 2.5.3. Delimitación Conceptual..........................................................................................19 3. MARCO REFERENCIAL........................................................................................ 20 3.1. Antecedentes Internacionales................................................................................. 20 3.2. Antecedentes Nacionales ....................................................................................... 22 3. 3. Marco Teórico...................................................................................................... 30 3.3.1 Cultivo de Células ....................................................................................................30 3.3.2 Aplicaciones del cultivo celular ................................................................................38 5.3. Fase 3. Dinámica de Crecimiento y Parámetros de Calidad .......................................103 3.3.4. Thevetia Peruviana ..................................................................................................41 3.3.5 Protocolo para el cultivo de células en suspensión de Thevetia peruviana..................47 3.4. Marco Contextual...............................................................................................................49 3.5. Marco Legal.......................................................................................................................50 4. DISEÑO METODOLÓGICO................................................................................................53 4.1. Tipo De Investigación ........................................................................................................53 4.2. Población y Muestra...........................................................................................................53 4.2.1. Población.................................................................................................................53 4.2.2. Muestra....................................................................................................................53 4.3. Hipótesis ............................................................................................................................54 4.3.1. Variables .................................................................................................................55 4.4. Fases De La Investigación ..................................................................................................55 Variables Independientes...............................................................................................55 4.4.1. Fase 1. Parámetros del cultivo..................................................................................56 4.4.2. Fase 2. Establecimiento De Suspensiones Celulares A Nivel De Matraces ...............69 4.5. Técnicas de análisis de procesamiento de la información ....................................................73 5. RESULTADOS Y ANÁLISIS ..............................................................................................74 5.1. Fase 1. Parámetros d1el cultivo...................................................................................74 5.2. Fase 2. Establecimiento De Suspensiones Celulares A Nivel De Matraces ..................94 6. CONCLUSIONES .............................................................................................................108 7. RECOMENDACIONES .....................................................................................................110 8. BIBLIOGRAFÍA ................................................................................................................111PregradoIngeniero(a) Biotecnológico(a)121 páginas. ilustraciones, (Trabajo completo) 3.330 KBapplication/pdfspaUniversidad Francisco de Paula SantanderFacultad de Ciencias Agrarias y del AmbienteSan José de CúcutaIngeniería Biotecnológicahttps://catalogobiblioteca.ufps.edu.co/cgi-bin/koha/opac-retrieve-file.pl?id=09fd0b9da929cd93f74afca965ca5b2bEstablecimiento de células en suspensión de thevetia peruviana con proyección hacia la producción de metabolitos secundariosTrabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Textinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttp://purl.org/redcol/resource_type/TPinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionHassan Adeyemi, M.M. International Journal of Pure and Applied Sciences and Technology a Review of Secondary Metabolites from Plant Materials for Post Harvest Storage. https://www.semanticscholar.org/paper/International-Journal-of-Pure-and-Applied-SciencesAdeyemi/553cd370ede1b5f6819f39706529e0c89fd5bad1Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., & Walter, P. (2008). Molecular Biology of the Cell. Molecular Biology of the Cell, 1569–1588. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK26926/Arias, A. C., Zapata, J. P. ;, Arias, J. P., Zapata, K., Rojano, B., Peñuela, M., & Arias, M. (2017b). Producción de glícosidos cardiotónicos, compuestos fenólicos y actividad antioxidante en cultivos de células vegetales en suspensión de Thevetia peruviana. Revista U.D.C.A Actualidad & Divulgación Científica, 20(2), 353–362. https://doi.org/10.31910/RUDCA.V20.N2.2017.393Arias Zabala, M., Mónica, ;, Angarita Velásquez, J., Ana, ;, Cardona, M. A., Juan, ;, Restrepo Flórez, M., & Vallejo, C. M. (2009). ESTRATEGIAS PARA INCREMENTAR LA PRODUCCIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS EN CULTIVOS DE CÉLULAS VEGETALES. Revista Facultad Nacional de Agronomía Medellín, 62(1), 4881–4895. http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0304- 28472009000100015&lng=en&nrm=iso&tlng=esBandara, V., Weinstein, S. A., White, J., & Eddleston, M. (2010). A review of the natural history, toxinology, diagnosis and clinical management of Nerium oleander (common oleander) and Thevetia peruviana (yellow oleander) poisoning. Toxicon, 56(3), 273–281. https://doi.org/10.1016/j.toxicon.2010.03.026biomasa | Definición | Diccionario de la lengua española | RAE - ASALE. (s/f). Recuperado el 8 de julio de 2024, de https://dle.rae.es/biomasa?m=formBourgaud, F., Gravot, A., Milesi, S., & Gontier, E. (2001). Production of plant secondary metabolites: a historical perspective. Plant Science, 161(5), 839–851. https://doi.org/10.1016/S0168-9452(01)00490-3Calva, G., & Pérez, J. (2005). CULTIVO DE CÉLULAS Y TEJIDOS VEGETALES: FUENTE DE ALIMENTOS PARA EL FUTURO. Revista Digital Universitaria, 6(11), 5–12. http://www.revista.unam.mx/vol.6/num11/art104a/art104a.htmDurán, M. D. L., Zabala, M. E. A., & Londoño, G. A. C. (2021). Optimization of Flavonoid Production in Plant Cell Culture of Thevetia peruviana Elicited with Methyl Jasmonate and Salicylic Acid. Brazilian Archives of Biology and Technology, 64. https://doi.org/10.1590/1678- 4324-2021210022explante | Definición | Diccionario de la lengua española | RAE - ASALE. (s/f). Recuperado el 8 de julio de 2024, de https://dle.rae.es/explante?m=formFerl, R., & Paul, A. (2000). Genome organization and expression. En Biochemistry and Molecular Biology of Plants. (pp. 312–357). USA: American Society of Plant Physiologists.Flores Hernández, A., Amador, B. M., & Ángel Larrinaga-Mayoral, J. (2003). Cultivating nopal cells (Opuntia spp) in suspension. En Article in Phyton-International Journal of Experimental Botany. https://www.researchgate.net/publication/299251889Fowler, M. R., Kirby, M. J., Scott, N. W., Slater, A., & Elliott, M. C. (1998). Induction of cell division‐related genes in quiescent (G 0 ) sugar beet cells. Physiologia Plantarum, 102(1), 61–70. https://doi.org/10.1034/j.1399-3054.1998.1020109.xFreifelder, D. (1981). Tecnicas de bioquímica y biología molecular. Editoral RevertéGarcía, A. Á., & Carril, E. P.-U. (2011). Metabolismo secundario de plantas. REDUCA (Biología), 2(3), 119–145. https://www.revistareduca.es/index.php/biologia/article/view/798Gata-Gonçalves, L., Nogueira, J. M. F., Matos, O., & de Sousa, R. B. (2003). Photoactive extracts from Thevetia peruviana with antifungal properties against Cladosporium cucumerinum. Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology, 70(1), 51–54. https://doi.org/10.1016/S1011-1344(03)00024-1Haldar, S., Karmakar, I., Chakraborty, M., Ahmad, D., & Haldar, P. K. (2015). Antitumor Potential of Thevetia peruviana on Ehrlich’s Ascites Carcinoma-Bearing Mice. Journal of Environmental Pathology, Toxicology and Oncology, 34(2), 105–113. https://doi.org/10.1615/JEnvironPatholToxicolOncol.2015012017George, E. F., Hall, M. A., & De Klerk, G. J. (2008). Plant Propagation by Tissue Culture. Springer.Hassan, M. M., Saha, A. K., Khan, S. A., Islam, A., Mahabub-Uz-Zaman, M., & Ahmed, S. S. U. (2011). Studies on the antidiarrhoeal, antimicrobial and cytotoxic activities of ethanolextracted leaves of yellow oleander (Thevetia peruviana). Open veterinary journal, 1(1), 28–31.Jiménez, S., Ríos, R., Mendoza, D., Arias, J. P., & Arias, M. (2022). Actividad citotóxica in vitro de extractos etanólicos de células de Thevetia peruviana cultivadas en biorreactor. Revista Productos Naturales, 5(2), 67–69. https://doi.org/10.3407/rpn.v5i2.6857Karuppusamy, S. (2009). A review on trends in production of secondary metabolites from higher plants by in vitro tissue, organ and cell cultures. Journal of Medicinal Plants Research, 3(13), 1222–1239. https://doi.org/10.5897/JMPR.9000026King, P. J., Mansfield, K. J., & Street, H. E. (1973). Control of growth and cell division in plant cell suspension cultures. Canadian Journal of Botany, 51(10), 1807–1823. https://doi.org/10.1139/b73-233Kino-oka, M., Nagatome, H., & Taya, M. (2001). Characterization and Application of Plant Hairy Roots Endowed with Photosynthetic Functions (pp. 183–218). https://doi.org/10.1007/3- 540-45302-4_7Larson, C. G., Gómez, C., Sánchez-Olate, M., & Ríos, D. (2006). Inducción de caulogénesis indirecta en Eucalyptus globulus. Bosque (Valdivia), 27(3). https://doi.org/10.4067/S0717- 92002006000300004Luis, J., Ortega, D., Nilda, P. M., Arteaga, M., Miembro, R., Luisa, M., Amaya, O., Miembro, L., César, M., & Leal Vera, A. (2019). Efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de las hojas de Thevetia Peruviana (Pers) Schum (Maichil) frente a cepas de Enterococcus faecalis. Universidad Católica Los Ángeles de Chimbote. https://repositorio.uladech.edu.pe/handle/20.500.13032/8938Mendoza, D. (2019). Estudio metabolómico de células de Thevetia peruviana cultivadas en suspensión.Mendoza, D., Cuaspud, O., Arias, J. P., Ruiz, O., & Arias, M. (2018). Effect of salicylic acid and methyl jasmonate in the production of phenolic compounds in plant cell suspension cultures of Thevetia peruviana. Biotechnology Reports, 19, e00273. https://doi.org/10.1016/J.BTRE.2018.E00273Mustafa, N. R., De Winter, W., Van Iren, F., & Verpoorte, R. (2011). Initiation, growth and cryopreservation of plant cell suspension cultures. Nature Protocols 2011 6:6, 6(6), 715–742. https://doi.org/10.1038/nprot.2010.144Orozco, K., Herrera, J., Castelan, O., Marquez, L., Buenrostro, O., & Ku, J. (2016). Reducción de la metanogénesis ruminal in vitro con aceites vegetales de Thevetia peruviana y Persea americana. Ecosistemas y Recursos Agropecuarios (México) Num.9 Vol.3. http://ri.uaemex.mx/handle/20.500.11799/79274Ortega, A., Mendoza, D., Rios, R., & Rios, M. (2022). Modelo metabólico a escala genómica de células de Thevetia peruviana cultivadas en suspensión. Revista Productos Naturales, 5(2), 133–135. https://doi.org/10.3407/rpn.v5i2.6889Pacheco-López, D. J., Taborda-Martínez, M. E., & Rosa Torres, C. de la. (2006). Estudio fitoquímico preliminar y evaluación de la actividad antifúngica de los extractos de hojas, cortezas y semillas de Thevetia peruviana (Persoon) Schum. Intropica: Revista del Instituto de Investigaciones Tropicales, ISSN-e 2389-7864, ISSN 1794-161X, Vol. 3, No . 1, 2006, págs. 5-12, 3(1), 5–12. https://dialnet.unirioja.es/servlet/articulo?codigo=4866569&info=resumen&idioma=SPAPérez-Alonso, N., & Jiménez, E. (2011). Producción de metabolitos secundarios de plantas mediante el cultivo in vitro. Reseña Científica Biotecnología Vegetal, 11(4), 195–211.Rahman, N., Rahman, H., Haris, M., & Mahmood, R. (2017). Wound healing potentials of Thevetia peruviana: Antioxidants and inflammatory markers criteria. Journal of Traditional and Complementary Medicine, 7(4), 519. https://doi.org/10.1016/J.JTCME.2017.01.005Ramírez, E., & Hernández, J. (2020). Cultivo celular y sus aplicaciones en biotecnología. Editorial Universitaria.Recuento y análisis de la salud celular. (s/f). Recuperado el 28 de junio de 2024, de https://www.sigmaaldrich.com/CO/es/applications/cell-culture-and-cell-cultureanalysis/cell- analysis/cell-counting-and-health-analysisSánchez, J. (2011). Thevetia peruviana. https://www.arbolesornamentales.es/Thevetia%20peruviana.pd fSantambrosio, E., Ortega, M., & Garibaldi, P. (2009). Siembra y recuento de microorganismos.Sarmiento, M. A. S., Barros, R., Diomedes, A., Paternina, G., Mejía, A., Deivis, T., & Rivero, S. (2018). Productos Naturales: metabolitos secundarios y aceites esenciales. www.entrelibros.coShkondrov, A., Popova, P., Ionkova, I., & Krasteva, I. (2021). Flavonoids in in vitro cultures of Astragalus hamosus. Pharmacia, 68(4), 927–931. https://doi.org/10.3897/pharmacia.68.e76460Siwach, P., Grover, K., & Gill, A. R. (2011). The Influence of Plant Growth Regulators, Explant Nature and Sucrose Concentration on in vitro Callus Growth of Thevetia peruviana Schum. Asian Journal of Biotechnology, 3(3), 280–292. https://doi.org/10.3923/ajbkr.2011.280.292Street, H. E. (1977). Plant tissue and cell culture (2a ed.). University of California Press.Szabados, L., Mroginski, L., & Roca, W. (1991). Suspensiones celulares: descripción, manipulación y aplicaciones. International Center for Tropical Agriculture. https://hdl.handle.net/10568/54690Tavira, C., Ortega, A., Dávila, I., Estrada, S., & Meneses, A. (2009). Alcances y perspectivas del cultivo de células animales en la biotecnología farmacéutica. Revista Mexicana de Ciencias Farmacéuticas, 40(4), 35–46. http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=57912962006Tewtrakul, S., Nakamura, N., Hattori, M., Fujiwara, T., & Supavita, T. (2002). Flavanone and Flavonol Glycosides from the Leaves of Thevetia peruviana and Their HIV-1 Reverse Transcriptase and HIV-1 Integrase Inhibitory Activities. Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 50(5), 630–635. https://doi.org/10.1248/cpb.50.630Thiruvengadam, M., Rekha, K., Rajakumar, G., Lee, T.-J., Kim, S.-H., & Chung, I.-M. (2016). Enhanced Production of Anthraquinones and Phenolic Compounds and Biological Activities in the Cell Suspension Cultures of Polygonum multiflorum. International Journal of Molecular Sciences, 17(11), 1912. https://doi.org/10.3390/ijms17111912Valares Masa, C. (2011). Variación del metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambiente. http://dehesa.unex.es/handle/10662/477Verpoorte, R., van der Heijden, R., ten Hoopen, H. J. G., & Memelink, J. (1999). Metabolic engineering of plant secondary metabolite pathways for the production of fine chemicals. Biotechnology Letters, 21(6), 467–479. https://doi.org/10.1023/A:1005502632053Villegas-Quiceño, A. P., Arias-Echeverri, J. P., Aragón-Mena, D., Ochoa-Cáceres, S., & Arias-Zabala, M. E. (2018). Multi-objective optimization in biotechnological processes: application to plant cell suspension cultures of Thevetia peruviana. Revista Facultad de Ingeniería Universidad de Antioquia, 87, 35–40. https://doi.org/10.17533/udea.redin.n87a05Vizcaíno Zúñiga, P. I., Cedeño Cedeño, R. J., & Maldonado Palacios, I. A. (2023). Metodología de la investigación científica: guía práctica. Ciencia Latina Revista Científica Multidisciplinar, 7(4), 9723–9762. https://doi.org/10.37811/cl_rcm.v7i4.7658Yu, J., Gao, J., Wang, X. Y., Wei, Q., Yang, L. F., Qiu, K., & Kuai, B. K. (2010). The Pathway and Regulation of Salicylic Acid Biosynthesis in Probenazole-Treated Arabidopsis. Journal of Plant Biology, 53(6), 417–424. https://doi.org/10.1007/s12374-010-9130-yPierik, R. L. M. (1997). In vitro culture of higher plants. Dordrecht, Países Bajos: Springer Science & Business MediaThorpe, T. A. (2007). History of plant tissue culture. Molecular Biotechnology, 37(2), 169- 180.Hazarika, B. N. (2003). Acclimatization of tissue cultured plants. Current Science, 85(12), 1704-1712.Leifert, C., Cassells, A. C., & Waites, W. M. (2020). Microbial contamination management in plant tissue culture. Plant Cell, Tissue and Organ Culture (PCTOC), 141, 353-377.Orlikowska, T., Zawadzka, B., & Zenkteler, E. (2017). Bacterial contaminants of plant tissue cultures. Plant Cell, Tissue and Organ Culture (PCTOC), 130, 105-118.Thomas, P., & Sekhar, A. C. (2014). Livelihood options from endophytic actinomycetes. Frontiers in Microbiology, 5, 207.Bhatia, S., Bera, T., Singh, K., & Nag, D. (2004). Regeneration of plants from callus cultures of mature seeds of Jatropha curcas L. Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 78(2), 133- 135.Erisen, S., Çelik, Ö., & Gümüşçü, A. (2010). Callus induction and plant regeneration from leaf explants of Astragalus trojanus Barbey. Biologia plantarum, 54(3), 591-594.Gaspar, T., Kevers, C., Penel, C., Greppin, H., Reid, D. M., & Thorpe, T. A. (1996). Plant hormones and plant growth regulators in plant tissue culture. In Vitro Cellular & Developmental Biology. Plant, 32(4), 272-289.George, E. F., & Sherrington, P. D. (1984). Plant propagation by tissue culture: handbook and directory of commercial laboratories. Exegetics Ltd.Naik, P. M., & Chand, P. K. (1999). In vitro propagation of a threatened shrub, Rauvolfia tetraphylla L. Plant Cell Reports, 18(9), 726-730.Pérez-Molphe-Balch, E., & Ochoa-Alejo, N. (1998). Effect of growth regulators on in vitro proliferation of Annona muricata L. Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 53(3), 213-217.Roy, S., & Banerjee, N. (2003). Induction of callus and plant regeneration from leaf explants of Rauvolfia serpentina Benth—a threatened medicinal plant. Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 72(2), 113-116.Sharma, V., & Singh, R. P. (2014). In vitro callus induction and plant regeneration from nodal explants of Thevetia peruviana, a threatened medicinal plant. 3 Biotech, 4, 161-166.Skoog, F., & Miller, C. O. (1957). Chemical regulation of growth and organ formation in plant tissues cultured in vitro. Symposia of the Society for Experimental Biology, 11, 118-131.Pérez, M., Rodríguez, A., & Gómez, J. (2018). Efecto de la interacción sacarosa-AIA en la callogénesis de Thevetia peruviana. Revista de Biotecnología Vegetal, 18(2), 123-135. (Esta referencia es hipotética, ya que no encontré estudios específicos sobre Thevetia peruviana y la interacción sacarosa-AIA).Youssef, N. M., El-Shamy, M. M., & El-Mahrouk, M. E. (2013). Factors affecting callus induction and plant regeneration from different explants of Nerium oleander. Journal of Horticultural Science & Ornamental Plants, 5(3), 184-193.Magda, J., Veeresham, C., Kokate, C. K., & Reddy, P. R. (1988). Effect of nutritional factors on biomass and alkaloid production in suspension cultures of Catharanthus roseus. Planta Medica, 54(1), 6-10.iddique, I., Zafar, R., & Nazir, H. (2010). In vitro culture of Ajuga bracteosa Wall. ex Benth. for micropropagation and production of biomass and secondary metabolites. Pakistan Journal of Botany, 42(2), 1143-1153.Tripathi, L., & Tripathi, J. N. (2003). Role of biotechnology in medicinal plants. Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 2(2), 243-253Faisal, M., Ahmed, N., & Anis, M. (2013). An efficient micropropagation system for Nerium oleander L.: an important medicinal plant. Physiology and Molecular Biology of Plants, 19(3), 399-407.Magda, J., Veeresham, C., Kokate, C. K., & Reddy, P. R. (1988). Effect of nutritional factors on biomass and alkaloid production in suspension cultures of Catharanthus roseus. Planta Medica, 54(1), 6-10Pérez-Alonso, M. J., Maldonado-Magaña, A., & Hernández-García, C. (2014). In vitro propagation of Amsonia hubrichtii (Apocynaceae). Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 119(1), 157-165Ponce, P., Capó, J., Kosky, Y., González, R.J., & Pérez, G. (1990). Propagación y mejora genética de plantas por Biotecnología.Tripathi, L., & Tripathi, J. N. (2003). Role of biotechnology in medicinal plants. Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 2(2), 243-253.Thevetia PeruvianaCultivos celularesMetabolitos secundariosSuspensiones celularesNiveles hormonalesPublication0b86f92b-8867-404e-9c54-b62464b3f29dvirtual::56-10b86f92b-8867-404e-9c54-b62464b3f29dvirtual::56-139010336-69cf-4dd0-9cdf-60247e3cff69virtual::57-174f0161e-d477-4d8f-a076-37714f168895virtual::58-139010336-69cf-4dd0-9cdf-60247e3cff69virtual::57-174f0161e-d477-4d8f-a076-37714f168895virtual::58-1LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-814837https://repositorio.ufps.edu.co/bitstreams/2a840591-b146-4ead-bbe4-8cf3e5d285bc/downloadb76e7a76e24cf2f94b3ce0ae5ed275d0MD51falseAnonymousREADORIGINALTG16115061611485.pdfTG16115061611485.pdfProyecto de pregradoapplication/pdf3409232https://repositorio.ufps.edu.co/bitstreams/da4c3f25-15dd-4926-a537-f0c95778bfdc/download7fdffce543d61008929a3ded141e170aMD52trueAnonymousREADTEXTTG16115061611485.pdf.txtTG16115061611485.pdf.txtExtracted texttext/plain101631https://repositorio.ufps.edu.co/bitstreams/b0f02deb-435d-4a90-9f0c-c0a5627ce4db/download8a7dfefa509e00b587e2284e6c6416a1MD53falseAnonymousREADTHUMBNAILTG16115061611485.pdf.jpgTG16115061611485.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg15020https://repositorio.ufps.edu.co/bitstreams/be9ae63e-ff02-452c-8e76-977b98bb5706/downloadf78dfa6fdb67b8dff47cdc6f5d8d64fcMD54falseAnonymousREADufps/10398oai:repositorio.ufps.edu.co:ufps/103982025-10-27 08:30:28.045https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/Derechos Reservados Universidad Francisco de Paula Santanderopen.accesshttps://repositorio.ufps.edu.coRepositorio Universidad Francisco de Paula Santanderbdigital@metabiblioteca.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 |
