Identificación de biomarcadores de daño celular presentes en vesículas extracelulares provenientes de cardiomiocitos ac-16 cultivados en condiciones de hipoxia y su efecto en la viabilidad celular.

La causa más elevada de muerte por enfermedades cardiovasculares (ECV) es la enfermedad isquémica del corazón, que ocurre cuando el flujo sanguíneo hacia el corazón es insuficiente, lo que reduce la entrega de oxígeno. Por lo tanto, la hipoxia es un factor clave en el desarrollo y la progresión de l...

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Autores:
Angie Daniela, Ramírez Balaguera
Tipo de recurso:
Tesis
Fecha de publicación:
2024
Institución:
Universidad Francisco de Paula Santander
Repositorio:
Repositorio Digital UFPS
Idioma:
spa
OAI Identifier:
oai:repositorio.ufps.edu.co:ufps/10417
Acceso en línea:
https://repositorio.ufps.edu.co/handle/ufps/10417
Palabra clave:
Biomarcadores
Cardiomiocitos
Estudio de viabilidad
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Fuentes Díaz, Romina Esmeralda
Jurgensen Rangel, Mónica
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description La causa más elevada de muerte por enfermedades cardiovasculares (ECV) es la enfermedad isquémica del corazón, que ocurre cuando el flujo sanguíneo hacia el corazón es insuficiente, lo que reduce la entrega de oxígeno. Por lo tanto, la hipoxia es un factor clave en el desarrollo y la progresión de las ECV. En este estudio, se investigó la respuesta de las células de cardiomiocitos humanos AC-16 a la hipoxia. Para ello, se expusieron los cardiomiocitos a 1% de Oxigeno durante 1 hora, como control se utilizaron cardiomiocitos expuestos a 21% de oxígeno. Se evaluó el efecto de la hipoxia sobre la viabilidad celular, la expresión de proteínas de choque térmico (HSPs), la liberación de vesículas extracelulares pequeñas (sEV), y la presencia de hERG1 y HSP47 en la superficie de las sEV. Los principales resultados demuestran que la hipoxia disminuye en forma estadísticamente significativa la viabilidad celular, las sEV derivadas de cardiomiocitos expuestos a hipoxia contienen en su superficie la proteína hERG1 y HSP47, el preacondicionamiento hipóxico previene la mortalidad celular asociada a la hipoxia. En conclusión, nuestros hallazgos sugieren que las sEV liberadas por hipoxia poseen un efecto cardioprotector sobre la sobrevida celular que podría estar asociado al contenido de las proteínas hERG1 y HSP47 en su superficie, por lo que estas sEV podrían explorarse como biomarcadores de ECV.
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Al Rimon, R., Nelson, V. L., Brunt, K. R., & Kassiri, Z. (2022). High-impact opportunities to address ischemia: a focus on heart and circulatory research. American journal of physiology., H1221–H1230. https://doi.org/10.1152/ajpheart.00402.2022
BAYER S.A. (12 de Abril de 2022). BAYER Global. https://www.bayer.com/es/co/lasenfermedades-cardiovasculares-son-la-primera-causa-de-muerte-en-colombia-y-elmundo#:~:text=septiembre%2001%2C%202020- ,Las%20enfermedades%20cardiovasculares%20son%20la%20primera%20causa%20de% 20muerte%20en,15.543%20a%20enfer
Benzhi, C., Jianping, L., Jinghao, W., Xiaobin, L., Jing, A., Yanju, L., . . . Yanjie, L. (2012). microARN-124 regula la diferenciación de cardiomiocitos de células madre mesenquimales derivadas de médula ósea a través de la señalización de STAT3. Stem Cells, 30(8), 1746-1755. https://doi.org/https://doi.org/10.1002/stem.1154
Berthet, M., Denjoy, I., Donger, C., Demay, L., Hammoude, H., Klug, D., . . . Guicheney, P. (1999). C-terminal HERG mutations: the role of hypokalemia and a KCNQ1-associated mutation in cardiac event occurrence. Circulation, 1464–1470. https://doi.org/10.1161/01.cir.99.11.1464
Boulanger, C. M., Loyer, X., Rautou, P. E., & Amabile, N. (2017). Extracellular vesicles in coronary artery disease. Nature reviews. Cardiology, 259-272. https://doi.org/10.1038/nrcardio.2017.7
Celeste, S., Liping, L., Barnhart, B., & Young, R. (2008). Señalización Inducida por Hipoxia en el Sistema Cardiovascular. Annual Review of Physiology, 70, 51-71. https://doi.org/https://doi.org/10.1146/annurev.physiol.70.113006.100526
Chistiakov, D. A., Orejov, A. N., & Bobryshev, Y. V. (2016). Vesiculas extracelulares cardíacas en corazón normal e infartado. International Journal of Molecular Sciences, 17(63), 63. https://doi.org/10.3390/ijms17010063
Davidson, M. M., Nesti, C., Palenzuela, L., Walker, W. F., Hernandez, E., Protas, L., . . . Isaac, N. D. (2005). Novel cell lines derived from adult human ventricular cardiomyocytes. ournal of molecular and cellular cardiology, 133-147. https://doi.org/10.1016/j.yjmcc.2005.03.003
Domínguez Romero, Y., Montoya Ortiz, G., Novoa Herrán, S., Osorio Mendez, J., & Gomez Grosso, L. A. (2024). miRNA Expression Profiles in Isolated Ventricular Cardiomyocytes: Insights into Doxorubicin-Induced Cardiotoxicity. International journal of molecular sciences, 5272. https://doi.org/10.3390/ijms25105272
Feng, J., Zhan, J., & Ma, S. (2021). LRG1 promueve la apoptosis y la autofagia de cardiomiocitos inducida por hipoxia mediante la regulación del factor 1α inducible por hipoxia. Bioingeniería, 12(01), 8897-8907. https://doi.org/10.1080/21655979.2021.1988368
Feng, J., Zhan, J., & Ma, S. (2021). LRG1 promueve la apoptosis y la autofagia de los cardiomiocitos inducida por hipoxia al regular el factor 1α inducible por hipoxia. Bioengineered, 12(1), 8897-8907. https://doi.org/https://doi.org/10.1080/21655979.2021.1988368
Fortoul Van der Goes, T. (2017). Histología y biología celular (3ra ed.). Madrid: Mcgrawll-hill. https://accessmedicina.mhmedical.com/book.aspx?bookid=1995
Gartz, M., Darlington, A., Afzal, M. Z., & Strande, J. L. (2018). Exosomes exert cardioprotection in dystrophin-deficient cardiomyocytes via ERK1/2-p38/MAPK signaling. Scientific reports, 16519. https://doi.org/10.1038/s41598-018-34879-6
Hevia, D., Cifuentes, J., Alvarado, O., San Martín, P., Venegas, P., Coron, M., . . . Irarrázabal, C. E. (2017). En el Infarto agudo al miocardio los niveles plasmáticos de microvesículas extracelulares se elevan más precozmente que el aumento de la Troponina-I. Revista chilena de cardiología, 36(1), 24-33. https://doi.org/https://dx.doi.org/10.4067/S0718- 85602017000100003
Hong-Li, Z., Kai-Ying, J., Da, S., & Min, Y. (2017). Protective effect of HSP27 in atherosclerosis and coronary heart disease by inhibiting reactive oxygen species. Journal of Cellular Biochemistry, 2859-2868. https://doi.org/10.1002/jcb.26575
Jarolim, P. (2015). High sensitivity cardiac troponin assays in the clinical laboratories. Clinical chemistry and laboratory medicine, 635–652. https://doi.org/10.1515/cclm-2014-0565
Jehle, J., Schweizer, P. A., Katus, H. A., & Thomas, D. (2011). Novel roles for hERG K(+) channels in cell proliferation and apoptosis. Cell death & disease, 193. https://doi.org/10.1038/cddis.2011.77
Jiang, H., Zhao, H., Zhang, M., He, Y., Li, X., Xu, Y., & Liu, X. (2022). Cambios de carga de exosomas inducidos por hipoxia y efectos biológicos posteriores. Frontiers in Immunology, 13, 824188. https://doi.org/10.3389/fimmu.2022.824188
Lamothe, S. M., Guo, J., Li, W., Yang, T., & Zhang, S. (2016). The human ether-a-go-go-related gene (hERG) potassium channel represents an unusual target for protease-mediated damage. Journal of Biological Chemistry., 20387-20401. https://doi.org/10.1074/jbc.M116.743138
Lamothe, S. M., Song, W., Guo, J., Li, W., Yang, T., Baranchuk, A., . . . Zhang, S. (2017). Hypoxia reduces mature hERG channels through calpain up-regulation. FASEB journal : official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology., 5068–5077. https://doi.org/10.1096/fj.201700255R
Lu, X., Yang, B., Qi, R., Xie, Q., Li, T., Yang, J., . . . Song, J. (2023). Targeting WWP1 ameliorates cardiac ischemic injury by suppressing KLF15-ubiquitination mediated myocardial inflammation. Theranostics, 417-437. https://doi.org/10.7150/thno.77694
Lu, Y., Zhang, J., Han, B., Yu, Y., Zhao, W., Wu, T., . . . Zhang, F. (2022). Las vesículas extracelulares DJ-1 derivadas de hMSC condicionadas por hipoxia alivian la hipertrofia cardíaca al suprimir la disfunción de las mitocondrias y prevenir la degradación de ATRAP. Pharmacological Research, 187, 106607. https://doi.org/https://doi.org/10.1016/j.phrs.2022.106607
Martin-Ventura, J. L., Roncal, C., Orbe, J., & Blanco-Colio, L. M. (2022). Papel de las vesículas extracelulares como potenciales biomarcadores diagnósticos y/o terapéutcos en enfermedades cardiovasculares crónicas. Frontiers in Cell and Developmental Biology, 10, 2296-634. https://doi.org/10.3389/fcell.2022.813885
Martin-Ventura, J. L., Roncal, C., Orbe, J., & Blanco-Colio, L. M. (2022). Role of Extracellular Vesicles as Potential Diagnostic and/or Therapeutic Biomarkers in Chronic Cardiovascular Diseases. Frontiers in cell and developmental biology, 813885. https://doi.org/10.3389/fcell.2022.813885
Méndez-Muñoz, P. C., Martínez-Espitia, E., Paba-Rojas, C. E., Rodríguez-Perdomo, J., & SilviaHernandez, L. M. (2020, Julio 22). Mortalidad por enfermedad isquémica cardiaca según variables sociodemográficas en Bogotá, Colombia. Salud Bosque, 10(1), 2322-9462. https://doi.org/10.18270/rsb.v10i1.2828
Nakagawa, Y., Nishikimi, T., & Kuwahara, K. (2019). Atrial and brain natriuretic peptides: Hormones secreted from the heart. Peptides, 111, 18-25. https://doi.org/10.1016/j.peptides.2018.05.012.
Nguyen, D. T., Famiglietti, J. E., Smolchek, R. A., Dupee, Z., Diodati, N., Pedro, D. I., . . . Sawyer, W. G. (2022). Plataforma 3D In Vitro para Cultivo de Células y Explantes en Sólidos-Líquidos. Cells, 11(6), 950-967. https://doi.org/10.3390/cells11060967
OMS. (2024). Organización Mundial de la Salud. https://www.who.int/es/news/item/09-12- 2020-who-reveals-leading-causes-of-death-and-disability-worldwide-2000-2019
Osorio, L., Lozano, M., Soto, P., Moreno-Hidalgo, V., Arévalo-Gil, A., Ramírez-Balaguera, A., . . . Alcayaga-Miranda, F. (2024). Levels of Small Extracellular Vesicles Containing hERG-1 and Hsp47 as Potential Biomarkers for Cardiovascular Diseases. International Journal of Molecular Sciences, 4913. https://doi.org/10.3390/ijms25094913
Palacios, C. (2021). Uso de vesículas extracelualres procedentes de células madre mesenquinales en el tratamiento de isquemias cardíacas: una resivión bibliografíca. Trabajo de grado , Universitat Politécnica de Valencia, Ingeniería Agronómica y del Medio Natural, Valencia .
Saheera, S., Jani, V. P., Witwer, K. W., & Kutty, S. (2021). Extracellular vesicle interplay in cardiovascular pathophysiology. American journal of physiology. Heart and circulatory physiology,, H1749–H1761. https://doi.org/10.1152/ajpheart.00925.2020
Sciarretta, S., Yee, D., Nagarajan, N., Bianchi, F., Saito, T., Valenti, V., . . . Sadoshima, J. (2018). La activación de la autofagia inducida por trehalosa mejora la remodelación cardíaca después de un infarto de miocardio. Journal of the American College of Cardiology, 71(18), 2011-2014. https://doi.org/https://doi.org/10.1016/j.jacc.2018.02.066
Sherman, W., & Grosberg, A. (2020). Exploración de la forma y la función cardíaca: un enfoque de biología computacional a gran escala. WIREs Mechanismsof Disease, 12(2), 1470. https://doi.org/https://doi.org/10.1002/wsbm.1470
Sklifasovskaya, A. P., Blagonravov, M., Ryabinina, A., Goryachev, V., Syatkin, S., Chibisov, S., . . . Agostinelli, E. (2023). The role of heat shock proteins in the pathogenesis of heart failure. International journal of molecular medicine, 106. https://doi.org/10.3892/ijmm.2023.5309
Sluijter, J. P. (2018). Extracellular vesicles in diagnostics and therapy of the ischaemic heart: Position Paper from the Working Group on Cellular Biology of the Heart of the European Society of Cardiology. Cardiovasc Res, 1;114(1), 19-34. https://doi.org/10.1093/cvr/cvx211
Sluijter, J. P., Davidson, S. M., Boulanger, C. M., & Buzás, E. I. (2018). Vesículas extracelulares en el diagnóstico y la terapia del corazón isquémico: docuemnto de posición del grupo de trabajo sobre biología celualr del corazón de la Sociedad Europea de Cardiología. Cardiovascular Research, 117(1), 19-34. https://doi.org/https://doi.org/10.1093/cvr/cvx211
Taha, E. A., Ono, K., & Eguchi, T. (2019). Roles of Extracellular HSPs as Biomarkers in Immune Surveillance and Immune Evasion. International journal of molecular sciences, 4588. https://doi.org/10.3390/ijms20184588
Triana-Alcívar, H., Ureta-Pilligua, J., Mera-Flores, R., Rivadeneira-Mendoza, Y., & BermúdezCevallos, L. (2021). Corazón como órgano endocrino-metabólico. Sociedad Venezolana de Endocrinología y Metabolismo, 19(1), 13-26.
Wu, C. Z., Li, X., Hong, L., Han, Z. N., Liu, Y., Wei, C. X., & Cui, X. (2021). NOX4/Src regulates ANP secretion through activating ERK1/2 and Akt/GATA4 signaling in beating rat hypoxic atria. The Korean journal of physiology & pharmacology, 159–166. https://doi.org/10.4196/kjpp.2021.25.2.159
Xie, S., Xing, Y., Shi, W., Zhang, M., Chen, M., Fang, W., . . . Tang, Q. (2022). Cardiac fibroblast heat shock protein 47 aggravates cardiac fibrosis post myocardial ischemiareperfusion injury by encouraging ubiquitin specific peptidase 10 dependent Smad4 deubiquitination. Acta pharmaceutica Sinica, 4138–4153. https://doi.org/10.1016/j.apsb.2022.07.022
Yaghoubi, S., Najminejad, H., Dabaghian, M., Karimi, M., Abdollahpour-Alitappeh, M., Rad, F., . . . Bagheri, N. (2020). ¿Cómo regula la hipoxia los exosomas en las enfermedades isquémicas y el microambiente del cáncer? Unión Internacional de Bioquímica y Biología Molecular, 72(7), 1286-1305. https://doi.org/https://doi.org/10.1002/iub.2275
Yuruk Yildirim, Z. N., Usta Akgul, S., Alpay, H., Aksu, B., Savran Oguz, F., Kiyak, A., . . . Bilge, I. (2021). Progresión de la enfermedad renal crónica en niños y proteínas de choque térmico. Chaperones del Estres Celular, 6(26), 973-987. https://doi.org/10.1007/s12192- 021-01239-9
Zhang, X., Wu, Y., Cheng, Q., Bai, L., Huang, S., & Gao, J. (2022). Vesículas extracelulares en efermedades cardiovasculares: diagnóstico y tratamiento. Frontiers in Cell and Developmental Biology, 10, 875376. https://doi.org/ 10.3389/fcell.2022.875376
Zhu, L. P., Tian, T., Wang, J. Y., He, J. N., Chen, T., Pan, M., . . . Bai, Y. P. (2018). Hypoxiaelicited mesenchymal stem cell-derived exosomes facilitates cardiac repair through miR125b-mediated prevention of cell death in myocardial infarction. Theranostics, 6163– 6177. https://doi.org/10.7150/thno.28021
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Para ello, se expusieron los cardiomiocitos a 1% de Oxigeno durante 1 hora, como control se utilizaron cardiomiocitos expuestos a 21% de oxígeno. Se evaluó el efecto de la hipoxia sobre la viabilidad celular, la expresión de proteínas de choque térmico (HSPs), la liberación de vesículas extracelulares pequeñas (sEV), y la presencia de hERG1 y HSP47 en la superficie de las sEV. Los principales resultados demuestran que la hipoxia disminuye en forma estadísticamente significativa la viabilidad celular, las sEV derivadas de cardiomiocitos expuestos a hipoxia contienen en su superficie la proteína hERG1 y HSP47, el preacondicionamiento hipóxico previene la mortalidad celular asociada a la hipoxia. En conclusión, nuestros hallazgos sugieren que las sEV liberadas por hipoxia poseen un efecto cardioprotector sobre la sobrevida celular que podría estar asociado al contenido de las proteínas hERG1 y HSP47 en su superficie, por lo que estas sEV podrían explorarse como biomarcadores de ECV.PregradoIngeniero(a) Biotecnológico(a)83 páginas. ilustraciones, (Trabajo completo) 1.340 KBapplication/pdfspaUniversidad Francisco de Paula SantanderFacultad de Ciencias Agrarias y del AmbienteSan José de CúcutaIngeniería Biotecnológicahttps://catalogobiblioteca.ufps.edu.co/cgi-bin/koha/opac-retrieve-file.pl?id=b3bdf047ebf64464c8cd46e0c43b2934Identificación de biomarcadores de daño celular presentes en vesículas extracelulares provenientes de cardiomiocitos ac-16 cultivados en condiciones de hipoxia y su efecto en la viabilidad celular.Trabajo de grado - Pregradohttp://purl.org/coar/resource_type/c_46echttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1fhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85Textinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttp://purl.org/redcol/resource_type/TPinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionAkbarshakh, A., & Tanyalak, P. (2022). Vesículas Extracelulares, Inflamación y Enfermedad Cardiovascular. Células, 14(11), 2229. https://doi.org/https://doi.org/10.3390/cells11142229Al Rimon, R., Nelson, V. L., Brunt, K. R., & Kassiri, Z. (2022). High-impact opportunities to address ischemia: a focus on heart and circulatory research. American journal of physiology., H1221–H1230. https://doi.org/10.1152/ajpheart.00402.2022BAYER S.A. (12 de Abril de 2022). BAYER Global. https://www.bayer.com/es/co/lasenfermedades-cardiovasculares-son-la-primera-causa-de-muerte-en-colombia-y-elmundo#:~:text=septiembre%2001%2C%202020- ,Las%20enfermedades%20cardiovasculares%20son%20la%20primera%20causa%20de% 20muerte%20en,15.543%20a%20enferBenzhi, C., Jianping, L., Jinghao, W., Xiaobin, L., Jing, A., Yanju, L., . . . Yanjie, L. (2012). microARN-124 regula la diferenciación de cardiomiocitos de células madre mesenquimales derivadas de médula ósea a través de la señalización de STAT3. Stem Cells, 30(8), 1746-1755. https://doi.org/https://doi.org/10.1002/stem.1154Berthet, M., Denjoy, I., Donger, C., Demay, L., Hammoude, H., Klug, D., . . . Guicheney, P. (1999). C-terminal HERG mutations: the role of hypokalemia and a KCNQ1-associated mutation in cardiac event occurrence. Circulation, 1464–1470. https://doi.org/10.1161/01.cir.99.11.1464Boulanger, C. M., Loyer, X., Rautou, P. E., & Amabile, N. (2017). Extracellular vesicles in coronary artery disease. Nature reviews. Cardiology, 259-272. https://doi.org/10.1038/nrcardio.2017.7Celeste, S., Liping, L., Barnhart, B., & Young, R. (2008). Señalización Inducida por Hipoxia en el Sistema Cardiovascular. Annual Review of Physiology, 70, 51-71. https://doi.org/https://doi.org/10.1146/annurev.physiol.70.113006.100526Chistiakov, D. A., Orejov, A. N., & Bobryshev, Y. V. (2016). Vesiculas extracelulares cardíacas en corazón normal e infartado. International Journal of Molecular Sciences, 17(63), 63. https://doi.org/10.3390/ijms17010063Davidson, M. M., Nesti, C., Palenzuela, L., Walker, W. F., Hernandez, E., Protas, L., . . . Isaac, N. D. (2005). Novel cell lines derived from adult human ventricular cardiomyocytes. ournal of molecular and cellular cardiology, 133-147. https://doi.org/10.1016/j.yjmcc.2005.03.003Domínguez Romero, Y., Montoya Ortiz, G., Novoa Herrán, S., Osorio Mendez, J., & Gomez Grosso, L. A. (2024). miRNA Expression Profiles in Isolated Ventricular Cardiomyocytes: Insights into Doxorubicin-Induced Cardiotoxicity. International journal of molecular sciences, 5272. https://doi.org/10.3390/ijms25105272Feng, J., Zhan, J., & Ma, S. (2021). LRG1 promueve la apoptosis y la autofagia de cardiomiocitos inducida por hipoxia mediante la regulación del factor 1α inducible por hipoxia. Bioingeniería, 12(01), 8897-8907. https://doi.org/10.1080/21655979.2021.1988368Feng, J., Zhan, J., & Ma, S. (2021). LRG1 promueve la apoptosis y la autofagia de los cardiomiocitos inducida por hipoxia al regular el factor 1α inducible por hipoxia. Bioengineered, 12(1), 8897-8907. https://doi.org/https://doi.org/10.1080/21655979.2021.1988368Fortoul Van der Goes, T. (2017). Histología y biología celular (3ra ed.). Madrid: Mcgrawll-hill. https://accessmedicina.mhmedical.com/book.aspx?bookid=1995Gartz, M., Darlington, A., Afzal, M. Z., & Strande, J. L. (2018). Exosomes exert cardioprotection in dystrophin-deficient cardiomyocytes via ERK1/2-p38/MAPK signaling. Scientific reports, 16519. https://doi.org/10.1038/s41598-018-34879-6Hevia, D., Cifuentes, J., Alvarado, O., San Martín, P., Venegas, P., Coron, M., . . . Irarrázabal, C. E. (2017). En el Infarto agudo al miocardio los niveles plasmáticos de microvesículas extracelulares se elevan más precozmente que el aumento de la Troponina-I. Revista chilena de cardiología, 36(1), 24-33. https://doi.org/https://dx.doi.org/10.4067/S0718- 85602017000100003Hong-Li, Z., Kai-Ying, J., Da, S., & Min, Y. (2017). Protective effect of HSP27 in atherosclerosis and coronary heart disease by inhibiting reactive oxygen species. Journal of Cellular Biochemistry, 2859-2868. https://doi.org/10.1002/jcb.26575Jarolim, P. (2015). High sensitivity cardiac troponin assays in the clinical laboratories. Clinical chemistry and laboratory medicine, 635–652. https://doi.org/10.1515/cclm-2014-0565Jehle, J., Schweizer, P. A., Katus, H. A., & Thomas, D. (2011). Novel roles for hERG K(+) channels in cell proliferation and apoptosis. Cell death & disease, 193. https://doi.org/10.1038/cddis.2011.77Jiang, H., Zhao, H., Zhang, M., He, Y., Li, X., Xu, Y., & Liu, X. (2022). Cambios de carga de exosomas inducidos por hipoxia y efectos biológicos posteriores. Frontiers in Immunology, 13, 824188. https://doi.org/10.3389/fimmu.2022.824188Lamothe, S. M., Guo, J., Li, W., Yang, T., & Zhang, S. (2016). The human ether-a-go-go-related gene (hERG) potassium channel represents an unusual target for protease-mediated damage. Journal of Biological Chemistry., 20387-20401. https://doi.org/10.1074/jbc.M116.743138Lamothe, S. M., Song, W., Guo, J., Li, W., Yang, T., Baranchuk, A., . . . Zhang, S. (2017). Hypoxia reduces mature hERG channels through calpain up-regulation. FASEB journal : official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology., 5068–5077. https://doi.org/10.1096/fj.201700255RLu, X., Yang, B., Qi, R., Xie, Q., Li, T., Yang, J., . . . Song, J. (2023). Targeting WWP1 ameliorates cardiac ischemic injury by suppressing KLF15-ubiquitination mediated myocardial inflammation. Theranostics, 417-437. https://doi.org/10.7150/thno.77694Lu, Y., Zhang, J., Han, B., Yu, Y., Zhao, W., Wu, T., . . . Zhang, F. (2022). Las vesículas extracelulares DJ-1 derivadas de hMSC condicionadas por hipoxia alivian la hipertrofia cardíaca al suprimir la disfunción de las mitocondrias y prevenir la degradación de ATRAP. Pharmacological Research, 187, 106607. https://doi.org/https://doi.org/10.1016/j.phrs.2022.106607Martin-Ventura, J. L., Roncal, C., Orbe, J., & Blanco-Colio, L. M. (2022). Papel de las vesículas extracelulares como potenciales biomarcadores diagnósticos y/o terapéutcos en enfermedades cardiovasculares crónicas. Frontiers in Cell and Developmental Biology, 10, 2296-634. https://doi.org/10.3389/fcell.2022.813885Martin-Ventura, J. L., Roncal, C., Orbe, J., & Blanco-Colio, L. M. (2022). Role of Extracellular Vesicles as Potential Diagnostic and/or Therapeutic Biomarkers in Chronic Cardiovascular Diseases. Frontiers in cell and developmental biology, 813885. https://doi.org/10.3389/fcell.2022.813885Méndez-Muñoz, P. C., Martínez-Espitia, E., Paba-Rojas, C. E., Rodríguez-Perdomo, J., & SilviaHernandez, L. M. (2020, Julio 22). Mortalidad por enfermedad isquémica cardiaca según variables sociodemográficas en Bogotá, Colombia. Salud Bosque, 10(1), 2322-9462. https://doi.org/10.18270/rsb.v10i1.2828Nakagawa, Y., Nishikimi, T., & Kuwahara, K. (2019). Atrial and brain natriuretic peptides: Hormones secreted from the heart. Peptides, 111, 18-25. https://doi.org/10.1016/j.peptides.2018.05.012.Nguyen, D. T., Famiglietti, J. E., Smolchek, R. A., Dupee, Z., Diodati, N., Pedro, D. I., . . . Sawyer, W. G. (2022). Plataforma 3D In Vitro para Cultivo de Células y Explantes en Sólidos-Líquidos. Cells, 11(6), 950-967. https://doi.org/10.3390/cells11060967OMS. (2024). Organización Mundial de la Salud. https://www.who.int/es/news/item/09-12- 2020-who-reveals-leading-causes-of-death-and-disability-worldwide-2000-2019Osorio, L., Lozano, M., Soto, P., Moreno-Hidalgo, V., Arévalo-Gil, A., Ramírez-Balaguera, A., . . . Alcayaga-Miranda, F. (2024). Levels of Small Extracellular Vesicles Containing hERG-1 and Hsp47 as Potential Biomarkers for Cardiovascular Diseases. International Journal of Molecular Sciences, 4913. https://doi.org/10.3390/ijms25094913Palacios, C. (2021). Uso de vesículas extracelualres procedentes de células madre mesenquinales en el tratamiento de isquemias cardíacas: una resivión bibliografíca. Trabajo de grado , Universitat Politécnica de Valencia, Ingeniería Agronómica y del Medio Natural, Valencia .Saheera, S., Jani, V. P., Witwer, K. W., & Kutty, S. (2021). Extracellular vesicle interplay in cardiovascular pathophysiology. American journal of physiology. Heart and circulatory physiology,, H1749–H1761. https://doi.org/10.1152/ajpheart.00925.2020Sciarretta, S., Yee, D., Nagarajan, N., Bianchi, F., Saito, T., Valenti, V., . . . Sadoshima, J. (2018). La activación de la autofagia inducida por trehalosa mejora la remodelación cardíaca después de un infarto de miocardio. Journal of the American College of Cardiology, 71(18), 2011-2014. https://doi.org/https://doi.org/10.1016/j.jacc.2018.02.066Sherman, W., & Grosberg, A. (2020). Exploración de la forma y la función cardíaca: un enfoque de biología computacional a gran escala. WIREs Mechanismsof Disease, 12(2), 1470. https://doi.org/https://doi.org/10.1002/wsbm.1470Sklifasovskaya, A. P., Blagonravov, M., Ryabinina, A., Goryachev, V., Syatkin, S., Chibisov, S., . . . Agostinelli, E. (2023). The role of heat shock proteins in the pathogenesis of heart failure. International journal of molecular medicine, 106. https://doi.org/10.3892/ijmm.2023.5309Sluijter, J. P. (2018). Extracellular vesicles in diagnostics and therapy of the ischaemic heart: Position Paper from the Working Group on Cellular Biology of the Heart of the European Society of Cardiology. Cardiovasc Res, 1;114(1), 19-34. https://doi.org/10.1093/cvr/cvx211Sluijter, J. P., Davidson, S. M., Boulanger, C. M., & Buzás, E. I. (2018). Vesículas extracelulares en el diagnóstico y la terapia del corazón isquémico: docuemnto de posición del grupo de trabajo sobre biología celualr del corazón de la Sociedad Europea de Cardiología. Cardiovascular Research, 117(1), 19-34. https://doi.org/https://doi.org/10.1093/cvr/cvx211Taha, E. A., Ono, K., & Eguchi, T. (2019). Roles of Extracellular HSPs as Biomarkers in Immune Surveillance and Immune Evasion. International journal of molecular sciences, 4588. https://doi.org/10.3390/ijms20184588Triana-Alcívar, H., Ureta-Pilligua, J., Mera-Flores, R., Rivadeneira-Mendoza, Y., & BermúdezCevallos, L. (2021). Corazón como órgano endocrino-metabólico. Sociedad Venezolana de Endocrinología y Metabolismo, 19(1), 13-26.Wu, C. Z., Li, X., Hong, L., Han, Z. N., Liu, Y., Wei, C. X., & Cui, X. (2021). NOX4/Src regulates ANP secretion through activating ERK1/2 and Akt/GATA4 signaling in beating rat hypoxic atria. The Korean journal of physiology & pharmacology, 159–166. https://doi.org/10.4196/kjpp.2021.25.2.159Xie, S., Xing, Y., Shi, W., Zhang, M., Chen, M., Fang, W., . . . Tang, Q. (2022). Cardiac fibroblast heat shock protein 47 aggravates cardiac fibrosis post myocardial ischemiareperfusion injury by encouraging ubiquitin specific peptidase 10 dependent Smad4 deubiquitination. Acta pharmaceutica Sinica, 4138–4153. https://doi.org/10.1016/j.apsb.2022.07.022Yaghoubi, S., Najminejad, H., Dabaghian, M., Karimi, M., Abdollahpour-Alitappeh, M., Rad, F., . . . Bagheri, N. (2020). ¿Cómo regula la hipoxia los exosomas en las enfermedades isquémicas y el microambiente del cáncer? Unión Internacional de Bioquímica y Biología Molecular, 72(7), 1286-1305. https://doi.org/https://doi.org/10.1002/iub.2275Yuruk Yildirim, Z. N., Usta Akgul, S., Alpay, H., Aksu, B., Savran Oguz, F., Kiyak, A., . . . Bilge, I. (2021). Progresión de la enfermedad renal crónica en niños y proteínas de choque térmico. Chaperones del Estres Celular, 6(26), 973-987. https://doi.org/10.1007/s12192- 021-01239-9Zhang, X., Wu, Y., Cheng, Q., Bai, L., Huang, S., & Gao, J. (2022). Vesículas extracelulares en efermedades cardiovasculares: diagnóstico y tratamiento. Frontiers in Cell and Developmental Biology, 10, 875376. https://doi.org/ 10.3389/fcell.2022.875376Zhu, L. P., Tian, T., Wang, J. Y., He, J. N., Chen, T., Pan, M., . . . Bai, Y. P. (2018). Hypoxiaelicited mesenchymal stem cell-derived exosomes facilitates cardiac repair through miR125b-mediated prevention of cell death in myocardial infarction. Theranostics, 6163– 6177. https://doi.org/10.7150/thno.28021BiomarcadoresCardiomiocitosEstudio de viabilidadPublicationf3406f5c-0c63-489b-a661-03c793bf4f54virtual::107-1ecd39deb-7df9-4723-a5c7-0819b4246831virtual::108-1f3406f5c-0c63-489b-a661-03c793bf4f54virtual::107-1ecd39deb-7df9-4723-a5c7-0819b4246831virtual::108-1LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-814837https://repositorio.ufps.edu.co/bitstreams/c29c17c1-6658-4ee6-97bc-e28114412fc6/downloadb76e7a76e24cf2f94b3ce0ae5ed275d0MD51falseAnonymousREADORIGINALTG1611451.pdfTG1611451.pdfDocumento de proyecto de pregradoapplication/pdf1372150https://repositorio.ufps.edu.co/bitstreams/62e309c3-66a9-4cbf-85c9-c04c203d9fae/download6cac3173bafb762ad674fff78cd0adcaMD52trueAnonymousREADTEXTTG1611451.pdf.txtTG1611451.pdf.txtExtracted 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