El virus sincitial respiratorio (VSR) no requiere endocitosis para infectar células de epitelio bronquial humano normal (NHBE)

El virus sincitial respiratorio (VSR) es la causa más frecuente de bronquiolitis en menores de 2 años. Actualmente no hay vacunas disponibles para prevenir la infección. La infección por VSR se inicia mediante la fusión entre la membrana del virión y la liberación del genoma al citoplasma, lugar donde se llevará a cabo la transcripción y replicación. En la actualidad no está claro si el proceso de fusión tiene lugar en la membrana plasmática o dentro del endosoma. En este trabajo se compararon dos temperaturas de sincronización (4 °C y 22 °C) para determinar la cinética de entrada del VSR en las células epiteliales bronquiales humanas. Posterior a la inoculación, la entrada del virus fue bloqueada en diferentes momentos mediante la adición de un anticuerpo neutralizante o mediante una disminución de la temperatura a 4 °C. Además, se diseñó un virus que porta un gen viral adicional, el cual consta la beta-lactamasa fusionada con la fosfoproteína viral (P), la cual codifica una proteína quimérica que permite una detección rápida una vez que el virus deposita su contenido en el citoplasma. Los hallazgos mostraron que la temperatura de sincronización utilizada durante la inoculación determina el sitio de fusión. Una transición de 4 °C a 37 °C dio como resultado la entrada del VSR a través de la vía endosomal, pero también indujo la alteración de la actina F y la formación de “blebbing” en la membrana plasmática, independientemente si fueron o no infectadas por el virus. Una transición de 22 °C a 37 °C demostró que la entrada del VSR se da por la vía de fusión en la membrana plasmática y se confirmó que dicha transición no presenta formación de estructuras en la membrana ni la alteración del citoesqueleto de actina. Para determinar la contribución de la endocitosis en la infección por VSR, se evaluó el efecto de moléculas pequeñas que bloquean la endocitosis, previo y posterior a la adsorción de viriones, confirmando qué, al aplicar dichos compuestos posterior a la adsorción viral, el bloqueo de rutas endocíticas no afecta la infección. Estos resultados sugieren que el VSR normalmente ingresa a las células por fusión en la membrana plasmática y que la inducción de endocitosis por la sincronización de la infección a 4 °C puede ser considerado como un artefacto del modelo experimental causado por la distorsión del citoesqueleto que soporta la membrana plasmática.

• Autores: Cadena Cruz, Christian Camilo
• Tipo de recurso: Doctoral thesis
• Fecha de publicación: 2022
• Institución: Universidad del Norte
• Repositorio: Repositorio Uninorte
• Idioma: spa
• OAI Identifier: oai:manglar.uninorte.edu.co:10584/13271
• Acceso en línea: http://hdl.handle.net/10584/13271
• Palabra clave: Bronquiolitis -- Diagnóstico y tratamiento
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