Detección de antígenos de Salmonella spp., en productos avícolas del Tolima, por la técnica de Western Blot

Salmonella spp., es una bacteria Gram-negativa transmitida por el agua o alimentos contaminados como los productos de origen aviar. El objetivo de este estudio fue implementar la técnica de Western Blot para la detección de proteínas antigénicas de Salmonella spp., en canales de pollo y superficie d...

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Autores:
Tipo de recurso:
Fecha de publicación:
2018
Institución:
Universidad de Caldas
Repositorio:
Repositorio Institucional U. Caldas
Idioma:
eng
OAI Identifier:
oai:repositorio.ucaldas.edu.co:ucaldas/25448
Acceso en línea:
https://repositorio.ucaldas.edu.co/handle/ucaldas/25448
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Palabra clave:
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description Salmonella spp., es una bacteria Gram-negativa transmitida por el agua o alimentos contaminados como los productos de origen aviar. El objetivo de este estudio fue implementar la técnica de Western Blot para la detección de proteínas antigénicas de Salmonella spp., en canales de pollo y superficie de huevo y comparar dicha técnica con el cultivo microbiológico. Un total de 18 muestras de canales de pollo y 18 de huevo fueron colectadas de las 13 comunas y 5 plazas de mercado de la ciudad de Ibagué. Se obtuvo un lavado de la superficie del pollo y otro de la superficie del huevo; una alícuota fue procesada mediante el protocolo estándar internacional ISO para el aislamiento bacteriano. Otra alícuota fue centrifugada y separada mediante electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). Las proteínas separadas fueron transferidas a una membrana de nitrocelulosa a través de la técnica de Western Blot. El anticuerpo primario fue un antisuero policlonal antiSalmonella Enteritidis generado en conejo y el anticuerpo secundario, una IgG comercial de cabra anti-conejo conjugada con la enzima fosfatasa alcalina. La reacción de los dos anticuerpos fue detectada mediante la adición del substrato BCIP-NBT. Se detectaron bandas antigénicas deSalmonella spp., de 10, 15, 17 y 40 kDa y 10, 17, 25, 37 y 75 kDa en 15 de 18 (83,3 %) y 4 de 18 (22,2 %) muestras de canales de pollo y superficie de huevo respectivamente. Un total de 4 de las 36 muestras fueron positivas a Salmonellaspp., por aislamiento microbiológico. Se concluye que la técnica de SDSPAGE y Western Blot puede detectar exitosamente antígenos de Salmonella en canales de pollo y superficie de huevos y constituye una herramienta valiosa complementaria en el diagnóstico de la bacteria en productos avícolas.
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Núm. 1 , Año 2018 : Enero - Junio
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Se obtuvo un lavado de la superficie del pollo y otro de la superficie del huevo; una alícuota fue procesada mediante el protocolo estándar internacional ISO para el aislamiento bacteriano. Otra alícuota fue centrifugada y separada mediante electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). Las proteínas separadas fueron transferidas a una membrana de nitrocelulosa a través de la técnica de Western Blot. El anticuerpo primario fue un antisuero policlonal antiSalmonella Enteritidis generado en conejo y el anticuerpo secundario, una IgG comercial de cabra anti-conejo conjugada con la enzima fosfatasa alcalina. La reacción de los dos anticuerpos fue detectada mediante la adición del substrato BCIP-NBT. Se detectaron bandas antigénicas deSalmonella spp., de 10, 15, 17 y 40 kDa y 10, 17, 25, 37 y 75 kDa en 15 de 18 (83,3 %) y 4 de 18 (22,2 %) muestras de canales de pollo y superficie de huevo respectivamente. Un total de 4 de las 36 muestras fueron positivas a Salmonellaspp., por aislamiento microbiológico. Se concluye que la técnica de SDSPAGE y Western Blot puede detectar exitosamente antígenos de Salmonella en canales de pollo y superficie de huevos y constituye una herramienta valiosa complementaria en el diagnóstico de la bacteria en productos avícolas.Salmonella spp., is a Gram-negative bacterium transmitted to human by consumption of contaminated water and food consumption, mainly poultry products like eggs and chicken meat. The aim of this study was to implement the Western Blot technic to detect the presence of antigenic proteins of Salmonella spp., in chicken carcasses and egg surface and if possible to compare it with the traditional microbiological isolation. A total of 18 chicken carcasses and 18 eggs were collected from the 13 communes and 5 marketplaces of Ibagué city. A chicken carcass and egg surface washes were obtained and an aliquot from each one was processed by using standard international guidelines ISO 6579-1:2017 for bacterial isolation. Another aliquot was centrifuged and the pellet separated by polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Separated proteins were transferred in to a nitrocellulose membrane by Western blot. Primary antibody was an in-house rabbit polyclonal anti-Salmonella enteritidis antiserum and the secondary antibody was a goat anti-rabbit IgG conjugated with alkaline phosphatase. The reaction of the two antibodies was detected with the addition of the BCIP-NBT enzyme substrate and the image recorded with a digital camera. Antigenic bands of Salmonella spp. of 10, 15, 17 and 40 kDa and 10, 17, 25, 37 and 75 kDa were detected in 15 out of 18 (83,3 %) and 4 out of 18 (22,2 %) samples from chicken carcasses and egg surface respectively. A total of 4 out of 36 samples were positive to Salmonella spp., by microbiological isolation. It is concluded that the SDS-PAGE and Western blot technic can successfully detectSalmonella antigens in chicken carcasses and egg surface and it may constitute a valuable complementary tool for the detection of this microorganism in poultry products.Universidad de Caldas2018-01-01T00:00:00Z2025-10-08T21:57:23Z2018-01-01T00:00:00Z2025-10-08T21:57:23Z2018-01-01Artículo de revistahttp://purl.org/coar/resource_type/c_6501http://purl.org/coar/resource_type/c_2df8fbb1Textinfo:eu-repo/semantics/articleJournal articlehttp://purl.org/redcol/resource_type/ARTinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85application/pdfhttps://repositorio.ucaldas.edu.co/handle/ucaldas/2544810.17151/vetzo.2018.12.1.62011-5415https://doi.org/10.17151/vetzo.2018.12.1.6https://revistasojs.ucaldas.edu.co/index.php/vetzootec/article/view/3349eng8317212Revista Veterinaria y Zootecnia (On Line) Bopp, C.A. et al. Escherichia, Shigella, and Salmonella. En: Jorgensen, J. et al. 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