Estandarización de una prueba de funcionalidad de ADN y su comparación con diferentes tipos de matrices.

Introducción. Con el fin de permitir el estudio constante y riguroso de especímenes, nacieron las colecciones biológicas, las cuales consisten en la combinación de diferentes tipos de materiales biológicos almacenados de una manera sistemática. Para las ciencias afines a la biología molecular, que por lo general utilizan muestras biológicas sensibles a las condiciones ambientales, han existido problemas que limitan drásticamente su manejo. Normalmente se realizan cuatro pruebas de calidad descritas como: concentración, integridad, pureza y la funcionalidad, que es la encargada de evaluar la capacidad que tiene el ADN extraído en amplificarse de manera correcta mediante técnicas de reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Métodos. Se tomo de las colecciones una muestra de ADN humano de alta calidad como referencia, a la cual se le realizó una cuantificación para confirmar pureza y concentración. Posteriormente, con esta se ejecutaron varias PCR en gradiente tanto de temperatura como concentración de ADN, usando como base los valores descritos por Kitano y colaboradores y a partir de estos resultados, se estableció el perfil térmico, la concentración de los reactivos y del material genético. Para estimación de la sensibilidad de la PCR, se tomó el número de verdaderos positivos y de falsos negativos. Igualmente, el límite de detección se obtuvo mediante la PCR en gradiente de ADN y finalmente, se realizó una prueba Chi cuadrado, para conocer si hay dependencia o no entre la funcionalidad y cada una de las matrices, para los diferentes grupos de vertebrados. Resultados. Se estandarizó una prueba de funcionalidad y en total se realizado en 283 muestras, de las cuales, se observó una banda de aproximadamente 250 pares de bases(pb) en 147 de estas. En cada uno de los grupos analizados, se evaluaron diferentes tipos de muestras provenientes de tanto métodos de muestreo invasivos como no invasivos. Discusión y conclusiones. Dependiendo de cada uno de los grupos fue posible observar panoramas relativamente diferentes, por razones relacionas tanto con la calidad del material genético que se dispone dentro de las colecciones, como de la procedencia de este en relación con su obtención por métodos invasivos o no invasivos. Aunque los resultados del X2 mostraron la dependencia del tipo de muestra respecto al resultado de la prueba en dos de los tres grupos analizados, esto no demostró una mayor efectividad de métodos invasivos sobre los no invasivos o viceversa. En conclusión, con este trabajo de investigación se evidencio la importancia que tiene una prueba de funcionalidad en el marco de un banco de ADN dentro de una colección biológica, por el hecho de que con ella se realiza una evaluación holística de todos los procesos previos de una manera totalmente cualitativa.

• Autores: Escobar Londoño, Santiago; Martínez Garro, Juliana María; Mejía Franco, Fabián Gregorio
• Fecha de publicación: 2021
• Institución: Universidad CES
• Repositorio: Repositorio Digital - Universidad CES
• Idioma: spa
• OAI Identifier: oai:repository.ces.edu.co:10946/5302
• Acceso en línea: http://hdl.handle.net/10946/5302
• Palabra clave: PCR; Comparación de métodos; Calidad de ADN; Muestreo no invasivo
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• License: Restringido