Estandarización cualitativa de un protocolo de sonicación para la extracción de la enzima Pfu polimerasa en Escherichia Coli BL21-DE3 y su potencial uso en la investigación de nuevos fármacos contra la enfermedad de Alzheimer (2023)
En este proyecto se desarrolló una estandarización de un protocolo de sonicación para la extracción de la enzima Pfu polimerasa producida en la cepa de Escherichia coli BL21-DE3, con el objetivo de que esta enzima pueda ser posteriormente utilizada en un proyecto de desarrollo de una biofábrica productora de galantamina para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer. Para ello se generaron cultivos de bacterias E. coli BL21 (DE3) transformadas con el plásmido pET 16B-Pfu que posteriormente fueron inducidas mediante IPTG 1 mM. La expresión de la proteína fue verificada a través de electroforesis SDS-PAGE. La estandarización de extracción de proteínas se realizó a través de un proceso por sonicación en el que se evaluaron diferentes amplitudes de onda: 20%, 30%, 45%, 60% y 70% y resuspendiendo las células en buffer PBS. Se obtuvo mayor cantidad de Pfu, a partir del sobrenadante del cultivo inducido con IPTG y extraída con sonicación a un 45% y a un 70% de amplitud de onda. Se realizó también un control de viabilidad de las bacterias como indicador de la eficiencia de sonicación, el cual indicó que, bajo todas las amplitudes evaluadas, estas no se lisaban completamente. Con base en análisis de literatura se sugiere complementar el protocolo haciendo uso de un buffer específico para lisis con detergentes y o enzimas que contribuyan a la eficiente extracción de proteínas durante el proceso de sonicación, y aumentar la duración de los pulsos a las condiciones de amplitud encontradas como mejores.