Toehold switches: a synthetic biology tool for detecting TALE genes from Xanthomonas. (2022)
Xanthomonas phaseoli pv. manihotis (Xpm) es un bacilo Gram negativo que afecta a la yuca, una importante fuente de carbohidratos cultivada en más de 100 países tropicales y subtropicales. Los TALES son proteínas efectoras bacterianas de Xanthomonas y Ralstonia, que funcionan como activadores transcripcionales eucarióticos cuando se inyectan en las células huésped. Se ha demostrado que activan factores de susceptibilidad y por lo tanto actúan como factores de virulencia. También pueden actuar como factores de avirulencia activando inadvertidamente genes que directa o indirectamente inician una fuerte respuesta de defensa y por lo tanto hacen a la planta resistente al patógeno. Algunos TALEs han sido estudiados en Xpm, pero aún son necesarios más estudios sobre su papel en el añublo bacteriano de la yuca. Estos estudios se basan en gran medida en la clonación, que se ha demostrado que consume mucho tiempo y es difícil en el caso de los TALEs, principalmente debido a su naturaleza repetitiva y al hecho de que por lo general hay múltiples genes TALE en una célula dada. En consecuencia, se requiere un método eficiente para clonar estos efectores, preferiblemente combinado con una técnica de screening igualmente eficiente. Se ha demostrado que el ensamblaje de Gibson es útil en la clonación de TALEs. Además, los toehold switches han demostrado ser eficientes en la detección de la presencia de moléculas de ARN con una secuencia específica. A través de la construcción de un plásmido adecuado para el ensamblaje de Gibson de los TALEs de Xpm, y la inserción de un toehold switch optimizado en el genoma de E. coli, este trabajo presenta un acercamiento a un método efectivo de clonación de los TALEs de Xpm y una manera rápida de hacer screening de los clones obtenidos. Los resultados de este trabajo acelerarán la investigación sobre las funciones de los TALEs en Xpm y otros patovares de Xanthomonas.