Estandarización de un modelo de biofilm multiespecies endodóntico in vitro fase I (2021)
Introducción: La infección endodóntica primaria ocurre por colonización de microorganismos del género Streptococcus spp, Fusobacterium spp, Prevotella spp, Campylobacter spp, Capnocytophaga spp y Actinomyces spp. El propósito del tratamiento endodóntico es eliminar la pulpa, lograr una desinfección completa del conducto radicular mediante irrigantes y medicamentos; sin embargo, esto no siempre es exitoso. Por ello, es necesario implementar modelos de biopelículas multiespecies endodónticas que permitan a futuro evaluar la eficacia de sustancias antimicrobianas durante el tratamiento de infecciones endodónticas. Objetivo: Desarrollar y estandarizar un modelo de biofilm multiespecies endodóntico in vitro. Materiales y métodos: Se estandarizó un modelo de biofilm multiespecies endodóntico in vitro sobre láminas de vidrio. Se preparó una mezcla de bacterias con F. nucleatum ATCC 25586, A. isrraelii ATCC 12012, S. oralis ATCC 35037, P. endodontalis ATCC 35406, y E. faecalis ATCC 29212 ajustados espectrofotométricamente a 1 x 108 bacterias/mL. 400μL de la mezcla de bacterias, se inoculó por pozo sobre láminas de vidrio. Se formaron biopelículas de 3, 7 y 14 días a 37°C en condiciones de anaerobiosis. Se verificó viabilidad después de cada tiempo de formación mediante plaqueos en agar Brucella, sangre y BHI. La biomasa del biofilm fue calculada mediante el método de cristal violeta y el porcentaje de viabilidad bacteriana se determinó usando el kit (LIVE/DEAD® BacLight Bacterial Viability, Molecular Probes®). Se realizó análisis por MALDI-TOF para verificar identidad de colonias con fenotipo variable en el biofilm. Todos los experimentos fueron realizados por triplicado en experimentos independientes. Resultados: Se evidenció crecimiento de S. oralis y E. faecalis en los 3 tiempos de formación; A. isrraelii sólo creció a los 7 días, P. endodontalis solo creció a los 14 días de formación de biofilm y F. nucleatum no creció en ningún tiempo de incubación. La biomasa del biofilm disminuye conforme avanza el tiempo y el porcentaje de viabilidad es similar en los 3 tiempos. Conclusión: Se formaron biopelículas multiespecies endodónticas con un porcentaje de viabilidad alto y encontrando una reducción de la biomasa del biofilm conforme aumentan los días de formación.