Producción y caracterización de un anticuerpo policlonal dirigido contra la fosfoproteína del virus de la rabia (2007)
Introducción. La producción de una proteína viral recombinante facilita la aplicación de diversasmetodologías bioquímicas en investigación básica de los virus con relevancia clínica. Además,la obtención de un anticuerpo policlonal dirigido contra la proteína P permite el estudio de sufunción y está soportado en la inexistencia de un anticuerpo comercial dirigido contra esaproteína. Objetivo. Producir y caracterizar un anticuerpo policlonal dirigido contra la proteína Precombinante del virus de la rabia expresada en Escherichia coli. Materiales y métodos. El gen P que codifica para la proteína P del virus de la rabia, fueamplificado por reacción en cadena de la polimerasa de transcriptasa reversa y clonado en elvector de expresión PinPointTM Xa-1 T (PROMEGA). La proteína recombinante P fue expresadaen E. coli purificada por cromatografía de afinidad y usada para la producción del anticuerpopoliclonal anti-P. El anticuerpo obtenido fue purificado y caracterizado por inmunocitoquímicacon un sistema enzimático, inmunofluorescencia, Cell-ELISA fluorométrica y Western blotting. Resultados. La proteína recombinante se expresó eficientemente como una proteína de fusiónbiotinilada de aproximadamente 50 kd, que corresponde a la forma completa de la proteína Pdel virus de la rabia. El anticuerpo policlonal anti-P detectó con alta especificidad la proteína Pen cultivos de neuronas sensoriales infectados con el virus de la rabia. Conclusión. La proteína P recombinante expresada en E. coli se constituyó en un antígenoespecífico para producir un anticuerpo policlonal que reconoce la proteína P nativa en célulasinfectadas con el virus de la rabia.