Evaluación del metabolismo de la resazurina en función de la forma y tamaño de esferoides tumorales orales (2021)
Antecedentes: El cáncer oral es el crecimiento celular maligno localizado en la cavidad oral. El manejo terapéutico y/o quirúrgico de la enfermedad es muy agresivo y se basa en el estadio, localización y tamaño del carcinoma al momento del diagnóstico. Estudios recientes se han enfocado en la búsqueda de nuevas alternativas de tratamiento menos invasivas, menos costosas y con menores efectos adversos. Los ensayos basados en células han sido un pilar importante en estos estudios debido a que son modelos de fácil acceso y de menor costo si se compara con los modelos in vivo. Los cultivos 3D representan una organización espacial y un comportamiento celular muy similar al tumor, aunque se han evidenciado algunas limitaciones para usarlos de rutina en el laboratorio. El ensayo de reducción de resazurina (RR) o alamarBlue® se emplea como una medida indirecta para evaluar el número de células viables en un esferoide, sin embargo, debido a la variabilidad en tamaño, forma y actividad metabólica se han observado modificaciones en el metabolismo de la resazurina, que pueden dar lugar a una mala interpretación de los resultados del ensayo. Objetivo: Evaluar el metabolismo de la resazurina en función de la forma y tamaño de los esferoides de células CAL27. Materiales y Métodos: Se propagaron células CAL27 en frascos de cultivo T75 hasta llegar a una confluencia del 90%, las células se separaron del soporte, se centrifugaron a 1500 rpm y el pellet obtenido se utilizó para la conformación de los esferoides en doce diferentes densidades celulares, después de 72h de incubación se realizó el ensayo RR reemplazando 100 μl de medio por 100μl de una solución de resazurina (80 μM). Para garantizar la transformación de la resazurina a resofurina, los esferoides fueron incubados por 12 h. Los experimentos se realizaron en duplicado usando seis réplicas por cada densidad. Resultados: IMF emitida por los esferoides aumenta a medida que hay un aumento en el tamaño y área de los esferoides, así mismo se evidencio que en tamaños superiores a 300 μm algunos esferoides presentaban una forma irregular. Una agrupación descriptiva de cultivos esféricos y no esféricos dejó ver un aumento poco significativo en la IMF emitida por el grupo esférico. Como se esperaba, en los cultivos 2D se evidenció una mayor tasa del metabolismo de la resazurina con respecto a los cultivos 3D. Conclusiones: Con este trabajo se establecieron valores de referencia de IMF para esferoides de diferentes tamaños. Se demostró que el metabolismo de la resazurina en los esferoides de CAL27 exhibe una relación directamente proporcional al tamaño y densidad celular, sugiriendo que si un tratamiento afecta el tamaño de un esferoide se debería observar una disminución en la reducción de la resazurina.