Evaluación de la disminución de la expresión de Pink1 en eventos de fusión y fisión mitocondrial en un modelo de neuronas dopaminérgicas (2012)
Las mitocondrias están muy lejos de ser organelos estáticos. Actualmente está bien establecido que las mitocondrias están sometidas a un proceso constante de cambio, al cual se le ha denominado dinámica mitocondrial que incluye procesos de fusión y fisión. Hay muchas evidencias acerca de que la pérdida de función de Pink1 y de la dinámica mitocondrial son responsables de diferentes enfermedades neurodegenerativas, incluyendo el Parkinson tipo 2. En este trabajo se estudió el efecto del silenciamiento de Pink1 eventos de fusión y fisión mitocondrial en neuronas dopaminérgicas. La disminución de la expresión de Pink1 se realizó usando plásmidos lentivirales con dos secuencias de shRNA y mediante qPCR se comprobó que los niveles de Pink1 disminuyeron en más del 80%. Se hicieron ensayos de MTT para evaluar actividad mitocondrial, mientras que las proteínas de fusión fisión fueron analizadas mediante western blot y la morfología mitocondrial con microscopía confocal. Las células transducidas con el constructo shPink1 muestran una disminución en actividad mitocondrial y menores niveles de expresión de Drp1 y de Mfn2, en un 31 y 55%, respectivamente. Sus mitocondrias tienen una morfología principalmente fragmentada y también se encontró que estas células no responden de la misma manera que las células control ante el estímulo generado por la forskolina, un potenciador de la vía del cAMP que fosforila a Drp1, inactivándolo. De esta manera se propone que Pink1 puede ejercer un papel neuroprotector promoviendo fusión mitocondrial.