Posible efecto de dos presiones parciales de oxígeno en la vascularización del saco vitelino y la alantoides de embriones de pollo (Gallus domesticus) y en la expresión de VEGF y su receptor FLK-1 (KDR) (2011)
Con el objetivo de establecer el posible efecto de dos diferentes alturas en el peso embrionario y en la vascularización de las membranas extraembrionarias, se incubaron embriones de pollo a 355 y 1378msnm, y el día 3 y 4 de incubación, lo mismo que en el día 6 y 7 de incubación: se midió el peso del embrión y de las membranas extraembrionarias (día 3 y 4: saco vitelino - día 6 y 7 corioalantoides); se estimó el área vascular media, el porcentaje capilar y el área capilar media del saco vitelino y de la corioalantoides; se describió y cuantificó la inmunoexpresión del HIF-2α, del VEGF-A y de su receptor FLK-1 en las células del saco vitelino y en la corioalantoides; y se realizó la cuantificación relativa de la expresión del mRNA de las anteriores proteínas en el saco vitelino y en la corioalantoides mediante q-PCR. Los resultados de esta investigación mostraron que ni el peso del embrión ni del saco vitelino presentan diferencia estadísticamente significativa el día 3 y el día 4 en los embriones incubados en las dos diferentes alturas; no obstante que si hubo diferencia estadísticamente significativa en el área vascular media (p: 0.05), el porcentaje capilar (p: 0.05), el día 3 y el día 4; del porcentaje de células positivas a la expresión de VEGF-A (p: 0.05) y FLK-1 (p: 0.05) el día 3, y del porcentaje de células positivas a la expresión de HIF-2α (p: 0.05) y FLK-1 (p: 0.05) el día 4; y de la expresión relativa del mRNA del HIF-2α, VEGF-A y de su receptor FLK-1 el día 3 y el día 4 (p: 0.001 para la expresión relativa del mRNA de todos los tres genes el día 3; y p: 0.01; 0.01; 0.001 para la expresión relativa del mRNA de los respectivos genes el día 4) en los embriones incubados a 1378msnm. Además mediante tinción inmunohistoquímica se encontraron células positivas a HIF-2α y VEGF-A en el endodermo, endotelio y ectodermo; y células positivas a FLK-1 únicamente en el endotelio. Además, los resultados de la presente investigación también mostraron que ni el peso del embrión ni el de la corioalantoides presentan diferencia estadísticamente significativa el día 6 y el día 7 en los embriones incubados en las dos diferentes alturas; a pesar de que se presentó diferencia estadísticamente significativa en el área vascular media (p: 0.05), el porcentaje capilar (p: 0.05) y el área capilar media (p: 0.05); del porcentaje de células positivas a la expresión de HIF-2α (p: 0.05) y FLK-1 (p: 0.05); y de la expresión relativa del mRNA del HIF-2α (p: 0.05) y del FLK-1 (p: 0.01), el día 6 de incubación, en los embriones incubados a 1378msnm. Además mediante tinción inmunohistoquímica se encontraron células positivas a HIF-2α y VEGF-A en el endodermo, mesodermo, endotelio y ectodermo; y células positivas a FLK-1 en el mesodermo y en el endotelio de la corioalantoides. De los resultados se concluyó que el nivel de hipoxia (dada por la altura: 1378msnm) a la cual fueron sometidos los embriones en esta investigación si afecta la expresión tanto del HIF-2α, como del VEGF-A y de su receptor FLK-1 en el saco vitelino, el día 3 y 4 de incubación; pero únicamente la expresión del HIF-2α y el FLK-1 en la CAM el día 6 de incubación. Además, que dichos cambios en la expresión se reflejan en un aumento en la vascularización del saco vitelino y la corioalantoides. Y que la hipoxia a la cual fueron sometidos los embriones (dada por la altura: 1378msnm) no afecta el peso del embrión ni tampoco el del saco vitelino (el día 3 y 4) ni la corioalantoides (el día 6 y 7), bien sea porque dicho nivel de hipoxia no fue lo bastante severo para producir hipometabolismo, o bien, porque el aumento en la vascularización fue suficiente para contrarrestar la hipoxia. Finalmente, los resultados muestran que el día 7 de incubación del embrión del pollo, es un tiempo de transición muy importante durante el desarrollo de la corioalantoides, y como una falla en el crecimiento vascular de dicha membrana en respuesta a la hipoxia podría conducir a hipometabolismo con la concomitante reducción en el peso del embrión observada en los diferentes estudios en los que se han sometido embriones de pollo a hipoxia, y en los que se ha medido el peso del embrión después del día 7 de incubación. / Abstract. To evaluate the posible effect of two different altitudes on the embryonic weight and in the extraembryonic vascularization, chicken embryos were incubated at 355 and 1378masl, and on day three and four, and on day six and seven: the embryonic and extraembryonic weight were measured (day three and four: yolk sac – day six and seven: chorioallantois); the vascular media area, capillary percentage and capillary media area in the yolk sac and chorioallantois were estimated; the immunoexpression of HIF-2α, VEGF-A and its FLK-1 receptor were described and quantified in the yolk sac and chorioallantoic membrane; the quantification of relative mRNA expression of the above proteins in the yolk sac and chorioallantois was made using q-PCR. The results showed that neither embryonic weight nor yolk sac weight had statistical significant difference on day three and four on the embryos incubated at two different altitudes; nevertheless that there was statistical significant difference in the vascular media area (p: 0.05), capillary percentage (p: 0.05), on day three and four; of the positive cells percentage immunoreactives to VEGF-A (p: 0.05) and FLK-1 (p:0.05) on day three, and the positive cells percentage immunoreactives to HIF-2α (p: 0.05) and FLK-1 (p: 0.05) on day four; and the relative mRNA expression of HIF-2α, VEGF-A and its FLK-1 receptor on day three and four (p: 0.001 for the relative mRNA expression of the above genes on day three; and p: 0.01; 0.01; 0.001 for relative mRNA expression of the respective genes on day four) on the embryos incubated at 1378masl. Additionally, by immunohistochemistry staining, positive cells immunoreactives to HIF-2α and VEGF-A were found in the endoderm, endothelium and ectoderm; and positive cells immunoreactives to FLK-1 were found only in the endothelium. Furthermore, the results showed that neither embryonic weight nor chorioallantoic weight had statistical significant difference on day six and seven in the embryos incubated at two different altitudes; nevertheless that there was statistical significant difference in the vascular media area (p: 0.05), capillary percentage (p: 0.05) and capillary media area (p: 0.05); of the positive cells percentage immunoreactives to HIF-2α (p: 0.05) and FLK-1 (p: 0.05); and the relative mRNA expression of HIF-2α (p: 0.05) and FLK-1 (p: 0.01) on day six but not on day seven, on the embryos incubated at 1378masl. Moreover, by immunohistochemistry staining, positive cells immunoreactives to HIF-2α and VEGF-A were found in the endoderm, mesoderm, endothelium and ectoderm; and positive cells immunoreactives to FLK-1 were found in the chorioallantoic mesoderm and endothelium. On the basis of present results, it was concluded that the level of hypobaric hypoxia affects the expression of HIF-2α, VEGF-A and its FLK-1 receptor in the yolk sac, on day three and four of incubation; and the expression of HIF-2α, and FLK-1 in the chorioallantoic membrane, on day six of incubation. The absence of effects seen on the the embryonic and extraembrionic weight on the embryos submitted to hypoxia, might be due to the hypoxia level was not severe enough to produce hypometabolism, or because the increase in the vascularization in the extraembryonic membranes was enough to diminish the hypoxia effects; although it is expected that from the end of first week of incubation, there should be a delay on embryonic growth, which will conduce to low birth weight as it was observed on the present work