Péptidos derivados de lactoferricina bovina como agentes anticancerígenos contra el carcinoma de células escamosas de la cavidad oral. (2016)
El carcinoma de células escamosas de la cavidad oral (OSCC) se encuentra entre los 10 tipos de cáncer más frecuentes en el mundo, siendo uno de los de peor pronóstico y con una de las tasas más bajas de supervivencia. Los tratamientos actuales para esta enfermedad causan graves efectos secundarios y tienen un éxito limitado, lo cual hace prioritario el desarrollo de nuevas alternativas terapéuticas que sean más efectivas y que permitan incrementar la expectativa y la calidad de vida de los pacientes. La finalidad del presente trabajo consistió en diseñar y evaluar posibles nuevos fármacos basados en péptidos derivados de la Lactoferricina Bovina lineal (LfcinB25) como alternativa terapéutica para el OSCC. Con este propósito, se sintetizaron diferentes péptidos lineales cortos derivados de la LfcinB25 los cuales se evaluaron in vitro en las líneas celulares de OSCC denominadas CAL27 y SCC15, utilizando como control una línea no tumoral de queratinocitos inmortalizados, la línea Het-1A. Los resultados evidenciaron que los péptidos lineales con el dominio RRWQWR (LfcinB(20-25)), presentaron una actividad citotóxica moderada en las células cancerígenas. A partir de estos resultados se diseñaron los péptidos LfcinB-Pal (péptido lineal palindrómico derivado del péptido LfcinB(20-25)) y LfcinB(20-25)4 (péptido tetramérico sintetizado a partir del péptido monomérico LfcinB(20-25)); se encontró que el péptido LfcinB-Pal presentó una citotoxicidad en la línea celular CAL27 que igualó el efecto citotóxico de la LfcinB25 (65%), no obstante, su citotoxicidad fue baja en la línea SCC15 (40%), en contraste el péptido LfcinB(20-25)4 causó una citotoxicidad significativa (90%) en las líneas de OSCC, superando el efecto citotóxico de los péptidos lineales. El péptido tetramérico mostró selectividad por las células de OSCC al presentar una menor citotoxicidad en la línea celular no tumoral Het-1A (62%), además no presentó un efecto hemolítico a menos que la concentración del péptido fuese 5 veces mayor a la evaluada en las líneas celulares. El efecto citotóxico in vitro del péptido tetramérico en las células de OSCC fue rápido; este péptido indujo la formación de vesículas, la reducción del tamaño celular, la permeabilidad de la membrana celular y la pérdida de adherencia de las células luego de una hora de tratamiento, desencadenando la muerte celular por necrosis. Evaluaciones realizadas por microscopia electrónica permitieron evidenciar que el péptido tetramérico causó daños severos en la membrana celular y en las estructuras internas de las células de OSCC, en contraste, los daños estructurales causados en las células de Het-1A fueron menores, lo cual pone en evidencia su selectividad hacia células tumorigénicas. Nuestros resultados también mostraron que los péptidos eran rápidamente degradados por los metabolitos secundarios producidos por las células de OSCC in vitro. Con estos precedentes el péptido tetramérico se evaluó en un modelo in vivo de OSCC desarrollado en Hámster dorado. Luego de tratar a los animales con 15 dosis del péptido administrado de forma intratumoral (3 veces por semana), se encontró una reducción significativa en el volumen de los tumores, cuando el péptido se suministró a una concentración de 100 µg/mL. De manera particular se encontró que a concentraciones mayores (200 µg/mL y 300 µg/mL) su efecto antitumoral no fue significativo. Nuestros resultamos evidenciaron que luego de la tercera dosis con el péptido (tratamiento agudo), los tumores tratados a 100 µg/ml presentaron una frecuencia mayor de células en apoptosis, en tanto que a 300 µg/mL se presentó un número significativo de células en necrosis, mientras que los tumores tratados con 200 µg/mL, presentaron células tanto en necrosis como en apoptosis. Es decir que el péptido tetramérico presentó un efecto antitumoral diferencial que es dependiente de la dosis cuando se suministró de manera aguda. Luego de las 15 dosis de tratamiento (tratamiento crónico), todos los tumores tratados a 100 µg/mL, 200 µg/mL y 300 µg/mL presentaron principalmente células en apoptosis. Adicionalmente, se encontró que el péptido LfcinB(20-25)4 causó acelularidad en el parénquima del tumor e indujo una infiltración leucocitaria que fue proporcional a la dosis administrada, severa en los tumores tratados con 300 µg/mL, y leve en los tratados a 100 µg/mL Estos hallazgos sugieren que este péptido tetramérico a una dosis óptima, podría ser considerado como un nuevo candidato para el tratamiento terapéutico del OSCC.