Búsqueda y expresión de enzimas Lipolíticas sintetizadas por bacterias Epífitas de Ulva Lactuca presentes en el litoral rocoso “La Punta de la Loma” (Santa Marta – Colombia) (2017)
Teniendo en cuenta el reciente interés por identificar y expresar enzimas de origen marino, el objetivo de este estudio fue identificar y expresar enzimas lipolíticas en el ADN metagenómico de las bacterias epífitas de la macroalga Ulva lactuca. Para ello se realizaron actividades de extracción de ADN total bacteriano de la superficie de los talos de la macroalga e identificación de posibles genes lipolíticos a través de PCR con primers específicos y degenerados. También se llevó a cabo la sub-clonación y expresión de genes previamente identificados en una librería metagenómica construida con ADN total bacteriano de U. lactuca, y la secuenciación de los potenciales genes lipolíticos. Como resultado, se obtuvo una cantidad aceptable de ADN total de alto peso molecular y de muy buena calidad. Este ADN total sirvió como molde para identificar un fragmento correspondiente a una Tiolasa marina, una enzima estrechamente relacionada con la función lipolítica; y un fragmento que podría representar una lipasa verdadera en el metagenoma de las bacterias epífitas de U. lactuca. Adicionalmente, se verificó la actividad de dos clones positivos para la actividad lipolítica obtenidos de una librería metagenómica previa. Así, a través de sub-clonación se obtuvieron 54 sub-clones activos y se confirmó la actividad de 15 de ellos al degradar los sustratos Tween 20 y tributirina. La presencia de los insertos responsables de la actividad lipolítica de los subclones más activos, fue verificada vía PCR. En cuanto al componente cultivable, se obtuvieron tres cepas de la superficie de U. lactuca con muy buena actividad lipolítica, en donde la cepa C11 identificado como Vibrio alginolyticus, resultó ser la más activa. Los resultados del presente estudio permiten entender la diversidad genética que existe en los ambientes marinos, principalmente en macroalgas verdes. Así, este sería el primer reporte de enzimas lipolíticas sintetizadas por bacterias epífitas de Ulva lactuca en el Caribe colombiano.