Bases moleculares de elementos de la cascada de señalización en fotorreceptores microviliares (2014)
Las opsinas visuales animales han sido agrupadas, basándose en análisis de secuencias, en unas pocas categorías que se relacionan estrechamente con las principales clases morfológicas de fotorreceptores. En particular, las opsinas tipo R comprenden un amplio grupo de moléculas sensibles a luz encontradas en receptores visuales de artrópodos y moluscos, y receptores circadianos de vertebrados. Estas presumiblemente se acoplan a través de Gq a la cascada de fosfoinositidos; sin embargo los mecanismos efectores cuesta abajo permanecen controversiales, y evidencia en conflicto ha sido obtenida en diferentes especies. Las bases moleculares de esta vía de señalización han sido estudiadas sistemáticamente solo en Drosophila, por tanto surge la cuestión acerca de la posible divergencia entre especies y resalta la necesidad de una cobertura filogenética más amplia. Para llenar este vacío, se ha comenzado a identificar por PCR moléculas de señalización de luz putativas en fotorreceptores tipo R de filos ampliamente separados: los fotorreceptores microviliares del ojo de un molusco Pecten irradians y del tubo neural del cordado basal Anfioxo (Branchiostoma floridae). El transcriptoma de la retina de Pecten y el genoma de Anfioxo sirvieron como marco de trabajo para el diseño de primers, complementando criterios basados en homología. La búsqueda fue inicialmente enfocada en dos elementos de la fototransducción claves, la enzima regulada por luz y el potencial canal iónico activado por luz. Amplificaciones por PCR y extensión por RACE usando ADNc de la retina de Pecten permitieron obtener dos isoformas de PLC-β, mientras que un clon parcial de PLC fue obtenido en Anfioxo usando ADNc del tubo neural. De una búsqueda bioinformática, varios ortólogos de TRP tanto en Anfioxo como en Pecten fueron seleccionados como candidatos para la conductancia activada por luz. Dos TRPs fueron clonados en Anfioxo y un único TRP en Pecten. Anticuerpos contra péptidos de las secuencias de aminoácidos predichas y ribo-sondas fueron usadas para localizar su expresión por inmunocitoquímica e hibridación in situ respectivamente.