Desarrollo de un método para la identificación de carne gourmet según especie mediante amplificación y secuenciación del adn mitocondrial. fase i: amplificación enzimática de adn mitocondrial (2004)
Se probaron y modificaron varios métodos para la extracción de ADN total, a partir de productos cárnicos frescos y procesados. El método más apropiado consiste en una maceración del tejido con hielo seco, para luego digerir con proteinasa K, posterior extracción con fenol-cloroformo-alcohol isoamílico (PCI) y finalmente precipitación con etanol. A partir de 100 mg de tejido fresco se obtuvo un rendimiento promedio de 1.7 µg/µl de ADN total, mientras que para procesados los rendimientos fueron menores. A partir de las muestras de ADN, en 30 ciclos de PCR y con la utilización de oligonucleótidos conservados, dirigidos a un fragmento del gen citocromo b (cyt b), se obtuvo un máximo de 1300 ng de ADN del fragmento génico de interés por cada volumen de reacción de 100 µl. Estos rendimientos varían dependiendo de la fuente del tejido (fresco o procesado), así como su origen y el tiempo post mortem. El desarrollo de estos procedimientos rinde suficiente ADN vía PCR para utilizarlos en posteriores análisis, objeto de la fase II de este proyecto de investigación, que busca tipificar el origen animal de la muestra.