Evaluación del factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos bovino recombinante (rbGM-CSF) producido en dos sistemas eucariotas (2022)
Las células dendríticas (DC) son células presentadoras de antígeno (APC) profesionales capaces de capturar, procesar y presentar antígenos a linfocitos T CD4+ mediante la expresión de moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad clase II (MHC-II) formando complejos estables con péptidos antigénicos degradados en el compartimiento endosomal-lisosomal. La obtención de DC puede estar en dos estadios, el primero es el estadio inmaduro, cuya capacidad es de captura y procesamiento de antígenos y, el segundo es el estadio maduro característico de DC con la capacidad de generar una respuesta inmune especializada mediante la presentación antigénica. Las células dendríticas son generadas de manera in vitro a partir de células mieloides (MoDC) mediante la exposición del factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF) e Interleuquina 4 (IL-4), dos citoquinas especializadas en la activación, regulación, proliferación y diferenciación celular. En el presente estudio, la citoquina bovina GM-CSF fue expresada en Komagataella phaffii NRRLY-11430 y línea de células de mamífero COS-7, con un rendimiento de 374,8 μg y 643,9 μg, respectivamente, a partir de 450 mL de sobrenadante de cultivo para K. phaffii y 100 mL de sobrenadante de cultivo para células COS-7 el cual se obtuvo línea estable. Posteriormente, se evaluó la capacidad de rbGM-CSF para diferenciar monocitos a células dendríticas (MoDC) obteniendo una morfología de prolongaciones citoplasmáticas características de DC y un fenotipo determinado por una expresión de marcadores de superficie celular MHCII+, CD80+, CD86+ y CD14- cuando las DC se encuentran en estadio maduro, establecido por microscopía y citometría de flujo, respectivamente. Adicionalmente, se analizó la capacidad de las MoDC bovinas diferenciadas en la presentación de antígenos, mediante la formación de complejos péptido/MHC II con OVA[323-335] y VP1, en dos grupos de células, MoDC sin precargar y MoDC precargadas con CLIP; los resultados mostraron mayor unión al péptido VP1 a los 25 min de incubación cuando las células son precargadas con CLIP, siendo este diez veces más afín por el péptido VP1 que el péptido OVA, permitiendo exhibir mayores índices de moléculas de MHC-II activas en su superficie.