Determinación de la interacción del rotavirus WTEW con las proteínas de choque térmico en la membrana citoplasmática de las células KATO III (2015)
En el laboratorio de Biología Molecular de Virus de la Universidad Nacional de Colombia se está investigando si rotavirus WWM, TRUY, Wt1-5, O-ECwt y WTEW (generados en el laboratorio), pueden utilizarse como virus oncolítico. Trabajos previos sugieren que los aislamientos rotavirales infectan las líneas celulares tumorales Sp2/0- Ag14 (mieloma murino), U937 (linfoma histiocitico), REH (leucemia linfocítica aguda), PC3 (adenocarcinoma grado IV de próstata). MDA y MCF-7 (adenocarcinoma de mama) Este trabajo tuvo por objetivo determinar si hay o no interacción del rotavirus WTEW con las proteínas de choque térmico Hsp90, Hsp70, Hsp60, Hsp40 durante la entrada a la línea tumoral KATO III (carcinoma de estómago). Para esto se aislaron fracciones enriquecidas de membranas citoplasmáticas, se incubaron con rotavirus o se bloquearon con anticuerpos específicos anti-Hsp (completos o la porción F(ab’)2) y se adicionó rotavirus MOI 8. La interacción se observó mediante técnicas de ELISA de captura, coinmunoprecipitación y Western Blot. Para determinar el papel funcional de las HSPs, las células se incubaron con anticuerpos F(ab’)2 y luego con rotavirus por 12h a 37°C. El rotavirus se incubó con proteínas HSPs completas solubles durante 1h a 37°C y luego el complejo HSPs-rotavirus se adicionó a las células por 12h a 37°C. La infección en ambos casos se evaluó mediante inmunocitoquímica. Finalmente se incubaron las células con el rotavirus WTEW por 1 h a 4°C y luego se le adicionaron los péptidos sintéticos de cada Hsp por 1h a 4°C dejando por 12 h a 37°C en cámara de CO2. La infección se evaluó por ELISA de captura. Se determinó que existe interacción entre rotavirus WTEW con las HSPs de manera directa y funcional ya que al bloquear o alterar dicha unión se disminuye la infección, lo que sugiere que el rotavirus WTEW interacciona con las HSPs de la línea KATO III facilitando el ingreso del rotavirus a la célula.