Expresión del alergeno recombinante Blo t 5 como proteína de fusión unida a la Glutation-S-Transferasa (GST) (2003)
La disponibilidad de alergenos recombinantes en cantidades apropiadas y en buen grado de purificación evita el uso constante de extractos naturales. Blomi"a frcpi"caJJs (Bt) es una de las especies de ácaros del polvo doméstico encontradas en la ciudad de Cartagena, de la cual se han caracterizado y clonado varias de sus proteínas alergénicas. El alergeno recombinante Blo t 5 ha sido clonado e identificado como un alergeno mayor de Bt por inducir 70% de reactividad a la lgE en pacientes asmáticos en áreas tropicales. Este estudio tuvo como objetivo producir el alergeno recombinante Blo t 5 mediante su expresión como proteína de fusión unida a la Glutation-S Transferasa (GST), para futuros estudios sobre su aplicación como reactivo de diagnóstico y tratamiento. La expresión de la proteína Blo t 5 unida a la GST se realizó, a partir de la inducción de un cultivo de E co!i (transformadas con pGEX- 4T1) con lsopropyl 13-D-Thiogalactoside (IPTG) y su posterior purificación a través de columnas de Glutathione agarosa. Se obtuvieron 26,0467 mg de la proteína de fusión Blo t 5-GST purificada, y cuantificada por electroforesis en SDS -PAGE 15% y una curva de calibración standard de un stock de BSA 2 mg/ml. Las alícuotas de alergeno se conservan congeladas y liofilizadas para su posterior uso.