Mecanismos de modulación de la actividad de las células NK por macrófagos en una modelo murino. (2002)
Los mecanismos por los cuales la madre tolera a su feto semialogénico siguen siendo objeto de estudio en la inmunología de la reproducción. Se han propuesto varias hipótesis para explicar la tolerancia materna, pero entre ellas ha tomado más fuerza la combinación de la hipótesis inmunotrópica con la inmunosupresión local en la interfase materno-fetal. Algunos autores han postulado que uno de los mecanismos de la tolerancia materna al feto es por anergia de las células T como consecuencia de la producción de la indolamina 2-3 dioxigenasa (IDO) por el sincitiotrofoblasto. La IDO es una enzima que es capaz de metabolizar el aminoácido esencial triptófano, depletando el microambiente de este aminoácido el cual es esencial para la proliferación de las células T. La población de células del sistema inmune más abundante en la decidua es la de células NK (70%), por lo cual se ha tratado de establecer cuál es la función que éstas están ejerciendo en la implantación y el desarrollo embrionario. Las células NK uterinas tienen toda la maquinaria citolítica pero su actividad citotóxica es más baja que la de las células NK en sangre periférica, por lo que es válido considerar que estén siendo moduladas por otras células en la interfase maternofetal. Los macrófagos se encuentran también en decidua y constituyen 15-20% de la población celular. No se ha estudiado si estos macrófagos producen IDO como sí se ha descrito en monocitos de sangre periférica diferenciados a macrófagos con el CSF-1 y con el estimulo del IFN-g. Este proyecto plantea la posibilidad de explicar la inhibición de la capacidad citotóxica de las células NK, observada naturalmente en la interfase materno fetal, mediante el catabolismo del triptófano, y particularmente, a través de la expresión de la IDO en los macrófagos. Hipótesis Las células NK son dependientes del metabolismo del triptófano para su activación (citotoxicidad y producción de citoquinas) Los macrófagos a través de la producción de IDO son capaces de modular la activación de las células NK, tanto en la circulación general como en la interfase materno fetal. Objetivo general Evaluar la interacción de los macrófagos y las células NK, y la implicación de ésta en la tolerancia materna al feto. Objetivos específicos 1. Determinar si las células NK requieren del aminoácido triptófano para su activación. 2. Evaluar si los macrófagos modulan la actividad citotóxica y la producción de citoquinas por las células NK. 3. Establecer el papel de la enzima IDO, producida por los macrófagos, en la modulación de la activación de las células NK. 4. Determinar si las células NK , a través de la producción de INF-g, estimulan a los macrófagos para producir IDO Diseño experimental Este es un estudio experimental que busca determinar las interacciones entre las células NK y los macrófagos, y su papel en la interfase materno fetal. Para ésto se usará la cepa murina C57BL/6 y se separarán bazos y deciduas de ratonas gestantes para aislar los esplenocitos por infusión de medio RPMI, y las células mononucleares deciduales por digestión enzimática. A partir de estas células se obtendrán macrófagos por adherencia al plástico y células NK por estimulación con IL-2 para las de bazo y por selección positiva con la lectina Dolicus biflorus para las NK deciduales. A los macrófagos se les determinará la expresión, constitutiva y estimulada con IFN-g, del RNAm de la enzima IDO. Además se determinará la actividad enzimática de la IDO midiendo la disminución del triptófano en los sobrenadantes mediante espectrofluorometría. Se harán ensayos de inhibición de la IDO con el 1-metil-triptófano. Para evaluar las interacciones entre los macrófagos y las células NK se harán cocultivos en diferentes condiciones: células NK de bazo o deciduales activadas con IL-2, células NK de bazo o deciduales sin activación, macrófagos diferenciados de monocitos por CSF-1 o diferenciados sin CSF-1, macrófagos deciduales activados con IFN-g o sin activar.