Caracterización de la respuesta inmune innata de Lutzomyia Longipalpis. (2011)
La leishmaniasis visceral (LV), producida por el protozoo Leishmania chagasi, es potencialmente mortal y en Colombia afecta principalmente a población rural y niños menores de cinco años. Antes restringida a pequeños focos en el valle del río Magdalena, los casos de LV se están incrementando y diseminando a zonas no reportadas anteriormente. Su principal vector, Lutzomyia longipalpis, está ampliando su distribución en nuestro país. Las estrategias basadas en quimioterapia, protección personal y control vectorial mediante insecticidas, no han logrado interrumpir la transmisión. La distribución peridomiciliaria del vector y la transmisión focalizada de LV en Colombia, hacen viable el diseño de estrategias basadas en manipulación génica para interrumpir el ciclo infeccioso a nivel del vector. La potencial aplicación de estas estrategias requiere un extenso conocimiento de las interacciones moleculares vector-parásito. En el modelo Lu. longipalpis-L. chagasi el escaso conocimiento sobre tales interacciones está limitado principalmente a la exploración bioinformática del transcriptoma del vector. Proponemos entonces caracterizar la expresión de secuencias de Lu. longipalpis homólogas a genes relacionados con respuesta inmune contra protozoos en otros vectores, para determinar su asociación con la respuesta específica contra L. chagasi. Esperamos contribuir a la resolución de nuestra pregunta de investigación ¿Cuáles son los genes de Lu. longipalpis asociados a la respuesta inmune innata específica ante infección con L. chagasi? Objetivo. Identificar secuencias génicas de Lu. longipalpis asociadas a la respuesta inmune innata específica ante la infección con L. chagasi. Metodología. Mediante bioinformática se identificarán secuencias de Lu. longipalpis homólogas a genes relacionados con la inmunidad contra protozoos en otros insectos vectores. Se analizarán secuencias homólogas principalmente a quitinasas, transferrinas, defensinas y proteínas de reconocimiento de peptidoglucanos, genes de función antiparasitaria documentada. Las dinámicas de expresión de tales secuencias serán evaluadas en hembras de Lu. longipalpis sometidas a diferentes tratamientos: alimentación con sangre o infección con Escherichia coli o L. chagasi. Esta evaluación se realizará mediante transcripción inversa semicuantitativa y PCR en tiempo real. Una de las secuencias cuya expresión sea identificada como asociada a la infección con L. chagasi será blanco para la exploración de la metodología de silenciamiento mediante ARN de interferencia. Resultados esperados. La identificación de secuencias de Lu. longipalpis expresadas diferencialmente ante la infección de L. chagasi nos permitirá mejorar nuestro conocimiento sobre la respuesta inmune en este modelo y contribuir a la identificación de secuencias que, por afectar el desarrollo del parásito, sean potenciales blancos moleculares para estrategias de control de la transmisión de LV basadas en la manipulación genética del vector. La estandarización de la metodología de silenciamiento génico en Lu. longipalpis posibilitará su futura utilización como herramienta de estudios funcionales en este vector. Aportes adicionales. El desarrollo de este proyecto involucra la colaboración entre un centro de investigación nacional (CIDEIM) y dos internacionales (Serap Aksoy, Universidad de Yale (USA) y Carl Lowenberger, Universidad Simon Fraser (Canadá)), lo que permitirá intercambio de conocimientos y transferencia de tecnología en este campo de investigación. Este trabajo también incluye la formación de una estudiante colombiana a nivel de doctorado.