Caracterización química y evaluación de la actividad biológica sobre líneas celulares tumorales de extracto de hojas de Tillandsia usneoides (Barba de viejo) - Rojas Fonseca, Laura Yinneth (2021)
El género Tillandsia L. (Bromeliaceae) conocida popularmente como: Barba de viejo, bola de musgo, bola de heno y bola de Jamaica, comprende 694 especies con características morfológicas y fisiológicas diferentes. La especie T. usneoides, objeto de estudio del presente trabajo, se caracteriza por ser una planta sin raíces; tallos largos, filiformes, colgantes, con hojas esparcidas de hasta 2 cm de longitud. T. usneoides es utilizada en Colombia para el resfriado y además es usada como adorno en pesebres y decorativo de jardines. A pesar de la abundancia de T. usneoides en los ecosistemas colombianos y de los estudios con otras especies del género en el tema ambiental, no existe investigación científica acerca de esta especie cuanto a su potencial farmacológico en cáncer, así como también son escasos los trabajos sobre la composición química para T. usneoides, en los cuales se han reportado algunos triterpenoides y flavonoides. Teniendo en cuenta los antecedentes en la literatura, en este trabajo se buscó evaluar la composición química y actividad citotóxica de extracto y fracciones obtenidos a partir de las hojas de T. usneoides. Se colectaron hojas en la ciudad de Villa de Leyva, Boyacá, Colombia y se preparó un extracto etanólico por maceración, el cual se fraccionó mediante cromatografía al vacío, empleando solventes en polaridad creciente: hexano, diclorometano, acetato de etilo y etanol 50%. El extracto crudo y las fracciones fueron caracterizados químicamente mediante técnicas cromatográficas HPTLC, UPLC-DAD y UHPLC-MS-TQ. Posteriormente se realizó una purificación bioguiada de metabolitos activos a través de técnicas cromatográficas como columna (CC) por gravedad con silica, cromatografía por exclusión en Sephadex LH-20 (CE) y cromatografía de partición centrifuga (CPC). El extracto, fracciones y compuestos fueron evaluados cuanto a su actividad citotóxica frente a diferentes líneas celulares tumorales de seno (4T1 y MCF-7), y no tumoral (3T3), por ensayo colorimétrico MTT y se determinó el tipo de muerte que pueden inducir (apoptosis/ necrosis) en la línea celular 4T1 La caracterización química inicial permitió identificar la presencia de triterpenos y flavonoides (ácidos fenólicos y polifenoles ) como los metabolitos mayoritarios en el extracto crudo y fracciones. Así mismo, se encontró que el extracto etanólico crudo y las fracciones de diclorometano, acetato de etilo e hidroetanólica fueron citotóxicos y selectivos para ambas líneas celulares tumorales de seno. La inducción de muerte celular por parte del extracto y las fracciones en la línea celular 4T1 fue a través de apoptosis en comparación a las células tratadas con el control negativo. El fraccionamiento y subfraccionamiento permitió concentrar metabolitos activos en las distintas fracciones, destacándose un contenido mayoritario de triterpenos en la fracción diclorometano, y de polifenoles en las fracciones acetato de etilo e hidroetanólica. Estas separaciones permitieron obtener diversas subfracciones, que en su gran mayoría presentaran mejores CI50 y mejores IS, con valores como por ejemplo 1,95 μg/ml y 104, respectivamente. A partir de la fracción diclorometano se pudo identificar triterpenos de tipo cicloartano (cicloartano- 23-eno-3β,25-diol, cicloeucalenol acetato y 9,19-ciclolanostano-23-ene-3,25-diol,3- acetato,(3β,23E), los cuales ya habían sido previamente reportados para la especie, así como alcanzar un cierto grado de purificación de una mezcla de dos triterpenos cicloartanos, los cuales todavía están en proceso de identificación. En la fracción acetato de etilo se pudo identificar los triterpenos (23E)-25-hidroperoxicicloartano-23-en-3-ona e hidroxicicloartano-23-en-3-ona, por otro lado, también se observó la presencia del flavonoide 5,7,4’-trihidroxi-3,6,3’,5’-tetrametoxiflavona. Finalmente, la fracción hidroetanólica mostró la presencia de metabolitos de mediana a alta polaridad y se ¿ identificó el 5,4’-dihidroxi-3,7,3’,5’ tetrametoxiflavona. Estos resultados sugieren que la actividad citotóxica observada para el extracto crudo no se debe únicamente a un metabolito específico, como tampoco a un grupo de metabolitos en especial, además que la actividad citotóxica está asociada principalmente a metabolitos de mediana y alta polaridad.