Mejoramiento del medio de cultivo para producción de la lacasa recombinante POXA 1B de Pleurotus ostreatus en Pichia pastoris - Albarracín Pardo, Diego Armando (2016)
Las lacasas son un tipo de enzimas responsables de procesos de óxido-reducción sobre sustratos de naturaleza aromática. La obtención de estas enzimas a gran escala generalmente no es adecuada cuando se piensa en la secreción por fuentes nativas, por lo tanto, una alternativa es la expresión heteróloga para obtener rendimientos altos y producción de enzimas en mayor concentración. En un proyecto anterior, el grupo de Biotecnología Ambiental e Industrial (GBAI), logró la expresión de la lacasa recombinante POXA IB de Pleurotos ostreatos en Ptchia pastoris bajo el control del promotor de la gliceraldehido 3-fosfato deshidrogenasa (pGAP). Con el propósito de aumentar la actividad y la producción de esta enzima, en este trabajo se emprendió el mejoramiento de las condiciones del medio de cultivo mediante diseños estadísticos secuenciales, utilizando un diseño factorial de tipo Plackett-Bur/nan (DEPB) seguido de un diseño experimental One Factor (DEOF) con la consecuente comprobación del resultado final. Se estudió la estabilidad de la enzima a diferentes pHs y temperaturas y como variable respuesta o independiente se seleccionó la actividad enzimática (UL;1). Después del DEOF que permitió mejorar la concentración de extracto de levadura, se logró aumentar la actividad enzimática de 451 ± 6.46 UL;1 obtenida en el trabajo previo a 1343.52 ± 40.3 UL;1, lo que significó un incremento de aproximadamente 2.98 veces la actividad enzimática. Al determinar la estabilidad del sobrenadante concentrado se encontró que se retiene más del 90% de la actividad residual a 50°C y ~50% de la actividad residual a 70°C y que se retuvo el 60% de la actividad residual a pH 10 y el pH óptimo fue de 4, reteniendo más del 90% de la actividad enzimática residual.