Evaluación de la actividad enzimática de la lacasa recombinante poxa 1b expresada en Pichia pastoris usando residuos de crisantemo (2015)
Colombia es uno de los principales exportadores de flores al mundo, entre las que se encuentra el crisantemo. Los residuos generados durante su producción, generan un impacto ambiental negativo. Razón por la cual este trabajo de grado tuvo como objetivo evaluar la actividad enzimática de la lacasa recombinante POXA 1B expresada en Pichia pastoris usando residuos de crisantemo. Se realizó un estudio preliminar del cual se decidió que no se era necesario el agregar CuSO4 como cofactor de la actividad enzimática, cuando el residuo se encontraba presente. De acuerdo a esto, se planteó un diseño factorial, en el que se evaluó la concentración de glucosa, fuente de nitrógeno, porcentaje de inoculo y tiempo de cultivo. Como consecuencia de esto se obtuvieron los mejores resultados para la actividad enzimática, en la combinación con una concentración de glucosa 3% (p/v), nitrógeno (extracto levadura - peptona 1% (p/v)), concentración de inóculo 10% (v/v) y 168 h, con 2074 U/L de lacasa. Se analizó la productividad (actividad enzimática) y rendimiento producto a partir de sustrato (Yp/s) (glucosa) de los que obtuvieron que con la concentración de glucosa 3%, nitrógeno (extracto levadura -peptona 1%), concentración de inóculo 12% y 72 h de cultivo con una productividad del 21,4 UL-1h-1. Y con la concentración de glucosa 1%, nitrógeno (extracto levadura 1% -peptona 2%), concentración de inóculo 10% y 72 h, con un rendimiento del 81,913 U/g. Para complementar esto se verifico la técnica para la determinación del porcentaje de lignina presente en una muestra vegetal.