Análisis de la participación de los exosomas producidos por macrófagos en la activación endotelial y la dispersión del virus dengue -2. (2017)
Virus como el de la inmunodeficiencia humana (HIV) y el de la hepatitis C (HVC) utilizan la vía endocítica para ensamblar y liberar su progenie sin ser reconocidos fácilmente por el sistema inmune. Para ello, promueven la formación de unas vesículas denominadas intraluminales (ILV) que se almacenan únicamente en los cuerpos multivesiculares (MVB) secuestrando algunas proteínas del complejo ESCRT (Endosomal Sorting Complex Required for Transport). Los MVB, son orgánulos transitorios que favorecen el almacenamiento y la posterior degradación de proteínas, sin embargo, en algunas ocasiones las ILV no son degradadas y por el contrario son liberadas al espacio extracelular convirtiéndose en exosomas. De este modo los exosomas son vehículos de comunicación extracelular muy eficientes y para el caso del virus HCV los exosomas se convierten en elementos celulares que favorecen su ensamble y garantizan la evasión del sistema inmune, aumentando el éxito en la dispersión del virus, la cronicidad de la infección y la baja efectividad de los tratamientos. Recientemente se reportó que exosomas purificados de células humanas infectadas con HCV contenían partículas ensambladas, RNA o proteínas virales y fueron capaces de infectar nuevas células o estimular su activación. Además se encontró que la capacidad infecciosa de estas vesículas no disminuyó al ser incubadas con anticuerpos neutralizantes contra el virus, resaltando la versatilidad del virus para utilizar diferentes mecanismos celulares para garantizar su transmisión y permanencia en el tejido sin ser reconocido por el sistema inmune. El Virus del Dengue (DENV) (un virus de la misma familia del HCV), afecta cada vez más a la población mundial. Es bien sabido que la infección por DENV induce la exacerbación de la respuesta inmune mediada por macrófagos y linfocitos que directa o indirectamente afecta la función de barrera de las células endoteliales. Esto último determina los cambios en la permeabilidad del tejido y explica parcialmente la extravasación de plasma y los eventos hemorrágicos típicos de la enfermedad. A pesar de la importancia epidemiológica del DENV, se desconocen varios aspectos de la inmunopatogenía y de la dispersión del virus; en particular se desconoce si durante la infección con este virus se producen exosomas y si estos ayudan a propagar el virus y a modular de alguna forma la disfunción endotelial tal como lo hace el HCV. Por lo tanto, el presente proyecto busca definir y caracterizar la participación de los exosomas en la dispersión del DENV y en la disfunción endotelial, para ello evaluaremos la producción de exosomas a partir de sobrenadantes de macrófagos humanos infectados y no infectados con el DENV, posteriormente estas vesículas se caracterizarán, cuantificarán y se determinará la capacidad infecciosa de estás. Finalmente, se evaluará en células endoteliales si los exosomas producidos por macrófagos infectados, inducen cambios en la resistencia y permeabilidad endotelial y en la expresión de moléculas de adhesión y citoquinas como un indicador de activación endotelial. Los resultados obtenidos nos permitirán describir si la infección induce la producción de exosomas en macrófagos infectados, cual es el perfil proteico y si estos pueden ser un mecanismo de dispersión viral. Adicionalmente, se describirá si los exosomas producidos por los macrófagos cumplen algún papel en la inmunopatogenía de la enfermedad afectando directa o indirectamente la permeabilidad y la activación endotelial, lo cual podría también modular en parte la respuesta inmune.