Canales de cloruro de Leishmania como blancos terapéuticos contra Leishmaniosis. (2010)
Leishmania es responsable de enfermedades diseminadas globalmente cuyo mayor impacto se da en países tropicales incluido Colombia, en donde los casos por año se han duplicado en la última década. Hasta la fecha, no hay una vacuna eficaz contra las Leishmaniosis y los tratamientos farmacológicos disponibles muestran resistencia del parásito, alto costo y toxicidad. Gran parte de la investigación en Leishmania se ha hecho sobre la virulencia del parásito, el proceso de interacción con el macrófago durante la invasión parasitaria y la identificación y control de las respuestas inmunológicas. Sin embargo, el conocimiento sobre los mecanismos de homeostasis iónica en este parásito es escaso. Para mantener homeostasis iónica, volumen, osmolaridad y pH ante condiciones ambientales que se modifican durante su ciclo de vida, en su tránsito desde el medio alcalino del intestino de su vector invertebrado hasta un compartimiento intracelular ácido en su célula hospedera-macrófago (vacuola parasitófora: VP), Leishmania debe hacer ajustes y a su vez garantizar la entrada adecuada de nutrientes y salida de desechos. Nuestros estudios han mostrado expresión de corrientes de cloruro con características cinéticas y farmacológicas únicas luego de la inyección de mRNA de Leishmania en ovocitos. Las corrientes de cloruro están asociadas con control de volumen, osmolaridad y pH que son vitales para la supervivencia celular. Esperamos estudiar estas corrientes de cloruro de Leishmania, las moléculas que las generan y su importancia fisiológica en relación con control de pH, osmolaridad y volumen celular. Para determinar si las corrientes de cloruro detectadas son de Leishmania se harán estudios con membranas del parásito en donde se preserva el entorno lipídico natural y se descarte la formación de quimeras producto de la expresión de mRNA. Se propone la incorporación de membranas de Leishmania en ovocitos y/o liposomas para luego determinar las características de las corrientes que se registren electrofisiológicamente. De ser iguales a las detectas previamente se concluirá que las corrientes expresadas son del parásito. Además esperamos hacer registros de canal único que permitan la caracterización cinética y farmacológica de los canales que generan estas corrientes. A partir de secuencias de Leishmania homólogas de canales de cloruro esperamos clonar uno de estos usando clonación por homología con oligonucleótidos específicos o degenerados basados en múltiples secuencias. Posteriormente se proponen estudios funcionales para determinar su importancia mediante alteraciones de la expresión por transfección. Cambios en volumen, osmolaridad, pH, potencial de membrana y mediciones de cloruro intracelular pueden detectarse en promastigotes o liposomas con membranas de Leishmania incorporadas usando sondas fluorescentes, al tiempo que se determina el impacto de fármacos específicos para estudiar asociación de las corrientes de cloruro con homeostasis iónica y de pH. Esperamos determinar si las corrientes son de origen parasitario y explorar su importancia ya que corrientes como estas podrían estar involucradas en la adaptación del parásito a la VP y por tanto ser blanco terapéutico potencial.