Efecto inmunomodulador de extractos de plantas con potencial Leshmaniacida. (2010)
Con el presente proyecto se pretende determinar el efecto de extractos de plantas en la infección por Leishmania (Viannia) panamensis, la participación de células dendríticas (CDs) infectadas como células presentadoras de antígenos (CPA) y la inducción y/o activación de las células Th1 y reguladoras (Treg) de voluntarios con diferente fenotipo clínico (personas con infección subclínica, pacientes con leishmaniosis cutánea y donantes sanos) a quienes se les solicitará una muestra de sangre venosa. En estas muestras, se evaluará la participación de células Treg en la activación de células Th1. El poder determinar la participación de CDs y células Treg en infecciones por L. (V) panamensis permitirá que la respuesta inmune evaluada constituya un marcador inmunológico importante para identificar una respuesta efectiva protectora y/o curativa. Lo anterior permitirá a su vez evaluar la eficacia de nuevos compuestos con potencial tanto profiláctico como terapéutico de forma tal que un compuesto con potencial profiláctico deberá inducir tanto la producción de IL12 por parte de las CDs y la subsecuente producción de IFN, como células Treg que regulen el efecto de dicha citoquina para que no se desarrolle lesión, mientras que una molécula con potencial terapéutico deberá activar preferencialmente células Treg que ayuden en la resolución del granuloma y favorezca la cicatrización. Planteamiento del problema: El efecto inmunomodulador de compuestos antileishmaniales no ha sido suficientemente explorado : Muchas de los compuestos estudiados, a las cuales se les ha atribuido un potencial leishmanicida, son poco explorados a nivel inmunomodulador, desconociendo que si bien es importante el efecto directo que tienen sobre el parásito, in vivo cuando el compuesto es administrado, la activación óptima del sistema inmune jugará un papel fundamental en el control de la infección, potenciando el efecto anti-parasitario del fármaco. Específicamente, las CPA (Macrófagos y CDs) pueden verse favorecidas en la interacción fármaco-parásito, con la subsecuente activación de la respuesta de linfocitos T (LT) CD4+, fundamental para el control de infecciones por patógenos intracelulares (ej, Leishmania). Identificar sustancias que estimulan eficazmente estas células es determinante para el diseño de nuevos fármacos. Para explorar el efecto de estos compuestos en la interacción hospedero-patógeno, se desarrollarán experimentos in vitro en los cuales se evaluará: 1) La modulación de la maduración de CDs diferenciadas a partir de monocitos de sangre periférica humana y provenientes de voluntarios con la enfermedad parasitaria ó controles sanos, en presencia de extractos de plantas antileishmaniales y 2) El efecto que dicha modulación tiene en la inducción de la respuesta de células T fenotipo Th1 y reguladoras (Th1 y Treg). Luego de evaluar la infección por microscopía y citometría de flujo, se analizará el perfil de citoquinas producido durante la invasión y se evaluarán marcadores de superficie asociados con el estadio de maduración de las CDs (inmaduras y maduras). Es de anotar, que dentro de los mecanismos de evasión parasitaria, se ha descrito una inhibición en la maduración de la CD luego de la invasión y por consiguiente una disminución en la activación de los LTh1, asociados con la resistencia a la infección por Leishmania. Finalmente se determinaran poblaciones de Th1 y Treg según la expresión de marcadores de superficie (CD4+CD25- o CD4+CD25+, respectivamente) y la producción de citoquinas (IFN-? para Th1 y TGF-? e IL-10 para Treg). En resumen, CDs infectadas y expuestas a distintas concentraciones de compuestos (extractos de plantas antileishmaniales), serán analizadas a nivel fenotípico (Reversión de su fenotipo inmaduro) y funcional (Capacidad de activar LT-específicos) permitiendo demostrar cuales de ellos, además de su efecto antiparasitario directo, pueden favorecer la inducción de una respuesta inmune asociada ya sea con protección (resolución