Mecanismo de entrada del Virus Sincitial Respiratorio. (2010)
En Colombia, el virus sincitial respiratorio (VSR) es uno de los patógenos respiratorios más importantes, causando más del 41.8 % de los casos nuevos de infección respiratoria baja en niños. El objetivo a largo plazo de nuestra línea de investigación es hallar nuevas vías para prevenir o tratar la infección con VSR. Por lo tanto, hemos decidido estudiar los aspectos moleculares por los cuales el virus logra ingresar a la célula. El VSR cuenta con tres proteínas (VSR-F, VSR-G, VSR-SH) en su envoltura que le permiten interactuar con la célula blanco. Tanto la proteína G como la F contribuyen al paso de la adsorción del virus a la célula. Evidencia experimental indica que VSR entra a la célula mediante fusión a nivel de la membrana plasmática debido a un cambio conformacional en la proteína F que permite al péptido fusión insertarse en la membrana de la célula blanco, pero SE DESCONOCE LA LOCALIZACION PRECISA DE ESTE EVENTO. Además, la membrana de la célula no es una estructura homogénea, y esta constituida por muchos microdominios, como las balsas lipídicas. Nuestros datos preliminares muestran que el VSR toma ventaja de las balsas lipídicas para entrar a las células del epitelio bronquial humano. Consecuentemente, nosotros usaremos técnicas de microscopia confocal para determinar si el VSR se une de manera específica a las balsas lipídicas y desencadena el reclutamiento de las mismas en cultivos primarios de células normales del epitelio bronquial humano (CEBR). Para determinar cuán importantes son las balsas lipídicas para la infección, nosotros desestabilizaremos la estructura de las mismas mediante eliminación del colesterol libre de la membrana celular usando metil-beta ciclodextrina y lovastatina; la eficiencia de la infección se evaluará en este contexto usando técnicas de microscopía confocal y de citometría de flujo. Por último, nosotros determinaremos cuál de las proteínas de la envoltura viral está asociándose a las balsas lipídicas y facilitando su reclutamiento. Para este objetivo, nosotros produciremos las diferentes proteínas de la envoltura viral mediante tecnología del ADN recombinante y procederemos a determinar con cual fracción de la membrana plasmática de las CEBR se asocian mediante el procedimiento de extracción por detergente en frío seguido de fraccionamiento mediante centrifugación diferencial en sucrosa. Además, nosotros usaremos cepas mutantes del VSR deficientes en la proteína G y/o SH de la envoltura viral para determinar si el papel de estas proteínas en el reclutamiento de las balsas lipídicas de las CEBR. La participación de la proteína F se evaluará de manera indirecta. Esta investigación ayudará a clarificar el papel que están jugando las balsas lipídicas durante la penetración viral y cuál(es) proteína(s) de la envoltura viral se asocia(n) con el proceso.