Comparación de metodologías para la purificación de proteínas de membrana externa de Brucella abortus (1990)
Las proteínas de la membrana externa de la Brucella abortus, Cepa 19 y RB-51 se purificaron por dos métodos, el primero basado en la extracción secuencial por tratamientos sucesivos con detergentes y lisozima y el segundo, en la formación del saco de peptidoglican con sus proteínas asociadas, utilizando dodecil sulfato de so-dio (SOS) a 50°C y extracción directa de las proteínas de la membrana externa con 50 mM de MgCl2 en SDS-23 Mercaptoetanol a 37°. Se utilizó la sonicacion para lograr la ruptura bacterial y su efecto se comprobó por microscopia electrónica. Las proteínas obtenidas se caracterizaron por electroforesis en geles de poliacrilamida. El método de extracción por detergentes aniònicos débiles y dipolares y tratamiento con lisozima, comprobó ser superior en calidad, selectividad y concentración de las proteínas de interés. Los pesos moleculares obtenidos para las proteínas denominadas porinas van de 37 a 41 kilo Daltons (k0), asi mismo se detecta una proteína de bajo peso molecular (14kI3). Se detecto reacción especifica de las proteínas en sueros controles de bovinos con infección natural de B. abortus por to técnica de inmunotransferencia en papel de nitrocelulosa.